人Endostatin cDNA克隆及其在大肠杆菌中的表达

来源 :上海大学学报(自然科学版) | 被引量 : 0次 | 上传用户:jiajia0321
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Endostatin是一种新发现的血管生成抑制因子,具有很强的抗肿瘤活性.为了研究人Endostatin的生物学功能和作用机制,作者从人胎肝组织中克隆到人Endostatin cDNA,然后将其插入到pSQE表达质粒中,转化Escherichia.coli BL21(DE3),获得了pSQE-END/BL21(DE3)表达工程菌,对其诱导表达产物hEndostatin进行了分离、纯化和复性的研究.结果表明,hEndostatin的表达量可达菌体总蛋白的30%,表达产物主要以包涵体(Inclusion bodies,IBs)形式存在于菌体中.菌体经超声破碎、离心、洗涤,然后用Ni2+-Sepharose 6B柱一步法亲和层析,得到电泳纯度为95%的hEndostatin.通过研究GSSG浓度、pH值、复性时间等参数,获得了hEndostatin包涵体的最适复性条件.经细胞毒性试验测定,复性产物对1H11内皮细胞的ED50约为700 ng/ml.
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