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摘要：研究了地衣芽孢杆菌W10对烟草的促生作用及对生长相关基因表达的影响，结果表明：W10能明显增加烟草根长、株高、鲜质量；与对照相比，W10处理烟草后茉莉酸信号通路标志基因COI1和调节植物细胞生长的扩展基因NtEXP2、NtEXP6都不同程度上调表达。
关键词：地衣芽孢杆菌；烟草；促生作用；促生机制
中图分类号：S476.1；S572.04文献标志码： A文章编号：1002-1302（2016）05-0152-03
芽孢杆菌（Bacillus spp.）是植物病害生物防治研究和应用较多的一类生物防治细菌，其生物防治机制主要有营养和空间位点竞争、产生多种抑菌物质（如脂肽类抗生素、降解胞壁酶类、细菌素、抗菌蛋白、多肽类化合物等）、溶菌作用、促进植物生长、诱导植物抗病性等方面[1-2]。地衣芽孢杆菌（B. licheniformis）W10是笔者从根际筛选获得的1株生物防治细菌，对多种植物病原真菌均有较好的抑制作用，田间防治效果与化学药剂相当，已明确该菌株的防病机理涉及竞争定殖作用、产生抗菌蛋白和诱导植物产生抗病性[3-9]。但该菌株的促生作用尚不清楚。本研究对地衣芽孢杆菌W10在烟草上的促生作用及分子机制进行了初步研究，旨在为拓宽生物防治细菌地衣芽孢杆菌W10的应用领域奠定基础。
1材料与方法
1.1供试烟草和菌株
供试烟草品种三生烟（Nicotiana tabacum L. “Xanthi”）种子由笔者所在实验室提供；生物防治细菌地衣芽孢杆菌（B. licheniformis）W10从番茄根际土壤中分离获得。
1.2培养基
细菌培养基NB：5 g聚蛋白胨、3 g牛肉浸膏、1 g酵母膏、10 g蔗糖、1 L水，pH值7.0，用于W10菌株种子活化和摇瓶培养。水琼脂培养基：15 g琼脂、1 L水，用于烟草种子培养。1/2 MS培养基：4.42 g MS、30 g蔗糖、2 g植物凝胶、1 L水，pH值5.8，用于烟草培养。
1.3W10菌液制备
将活化的W10接种于150 mL NB中，28 ℃、180 r/min条件下培养2 d得到培养菌液，用平板计数法测量浓度，调制成1亿 CFU/mL，作为烟草处理菌液。
1.4烟草根长的测量
将三生烟种子在W10菌液中浸泡6 h，然后用15%次氯酸钠溶液表面消毒10 min，无菌水漂洗3次后，呈直线均匀排列在水琼脂培养基平板上，竖置于26 ℃光照培养箱中培养（16 h/d光照）。根据平板摆放位置距离光源远近，设3个处理，分别为：处理1，距离光源近；处理2，距离光源中等；处理3，距离光源远。每个处理重复3次（平板），每个平板10粒烟草种子，同时设清水对照（CK）。待处理的烟草种子根长至25 mm左右时，测量各处理根长。
1.5烟草株高和鲜质量的测量
将三生烟种子于15%次氯酸钠溶液中消毒10 min，用无菌水漂洗3次后，均匀放入1/2MS平板中，并置于26 ℃光照培养箱中培养（光照时间16 h/d），出芽后幼苗长至高1～2 cm 时将其轻轻从培养基中连根拔出，用W10菌液处理 6 h，后移入含灭菌营养土的盆钵中，置于温室培养，设清水对照。距光源远近设3个处理，每个处理重复3次，每个重复6株烟草。待烟草幼苗三叶一心时测量株高。
上述烟草幼苗长至五叶一心时，用W10菌液浇灌烟草根部，每株10 mL，10 d后测量整株烟草的鲜质量。
1.6基因表达分析
1.6.1烟草总RNA提取和检测W10菌液灌根处理2 d后，取烟草上部嫩叶，采用AxyPrep总RNA提取试剂盒[美国Axygen生物技术（杭州）有限公司]提取烟草叶片总RNA。用琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整性，分光光度计检测RNA的纯度，质量符合要求后计算RNA样品的浓度（D260 nm×稀释倍数×40），RNA样品于-20 ℃保存备用。
1.6.2半定量RT-PCR分析取2 μg RNA作为模板，以Oligo（dT）15为引物，用反转录酶M-mLV（RNase H—）（Promega公司）合成cDNA。取适量反转录产物为模板，进行PCR反应。以在真核生物中高度保守并且组成性表达的EF-1α基因为内参。拟PCR扩增的基因有抗病防卫反应调控基因NPR1[10]，茉莉酸（jasmonic acid，JA）信号通路分子标志基因Thi2.1、COI1，调节植物细胞生长的扩展基因NtEXP2、NtEXP6[11]。基因名称、登录号、上游引物/下游引物、涵盖长度、PCR反应条件等信息见表1。
采用琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物。
2结果与分析
2.1地衣芽孢杆菌W10对烟草根长的影响
从图1可见，地衣芽孢杆菌W10对烟草根生长具有明显的促进作用，其中距离光源近的处理促生作用最明显，比对照根长增加了105.6%，距离光源较远的处理也比对照增长36.0%。
2.2地衣芽孢杆菌W10对烟草株高的影响
由图2可见，经地衣芽孢杆菌W10处理后，烟草株高比对照增加了41.2%～76.5%，距离光源越近，烟草株高不断增加，但促生作用在减少。如近光源处理烟草株高达到了 12 cm，但促生作用只有41.2%；远光源处理株高虽然只有 10 cm，但促生作用达到了76.5%。
2.3地衣芽孢杆菌W10对烟草鲜质量的影响
由图3可知，地衣芽孢杆菌W10处理后，烟草鲜质量明显增加，比对照增加101.9%～114.6%，且各光源距离处理间差异不明显，这可能与烟草五叶一心期进行了1次W10菌液灌根有关，W10菌液灌根促进烟草生长，减小了不同光源距离处理间的差异。 2.4烟草中促生相关基因的表达
从图4可以看出，地衣芽孢杆菌W10菌液处理烟草后，JA信号通路标志基因COI1以及调节植物细胞生长的扩展基因NtEXP2、NtEXP6都能不同程度地被诱导表达，其中COI1、NtEXP2呈组成性本底表达（对照），W10菌液诱导后表达量略有上升。W10菌液处理的烟草中NtEXP6基因表达微弱，但对照检测不到该基因的表达。多次PCR分析并未发现抗病防卫反应调控基因NPR1、JA信号通路标志基因Thi2.1的表达。
3结论与讨论
目前芽孢杆菌对植物促生作用的报道集中在枯草芽孢杆菌（B. subtilis）[12-15]、解淀粉芽孢杆菌（B. amyloliquefaciens）[16-18]、蜡状芽孢杆菌（B. cereus）[19-20]、巨大芽孢杆菌（B. megaterium）[21-22]，涉及蔬菜、果树、小麦、烟草等植物。
而地衣芽孢杆菌的促生作用及机制研究未见报道。本研究发现，地衣芽孢杆菌W10对烟草根长、株高、鲜质量都有明显的促生作用，同时也发现距离光源距离对烟草生长也有一定影响，一般距离光源近的处理生长量较大，这可能是由于近光源位置光照度和温度都较高，有利于烟草植株的发育和生长，与光、温度等环境因子影响植物内源茉莉酸信号的变化[23]有关。本研究中有关根长、株高试验中，只进行了1次W10菌液处理，诱导强度较小，对烟草的促生作用小，从而导致个别处理和对照间差异不显著；而鲜质量试验进行了2次诱导处理，诱导强度较大，对烟草的促生作用也大，所有诱导处理和对照间差异均达到显著水平。因此，地衣芽孢杆菌W10须要多次诱导处理才会具有较好的植物促生作用。
JA和水杨酸（salicylate，SA）信号转导途径之间主要模式是拮抗作用，NPR1是SA信号途径中抗病防卫反应的正调控基因，在许多病原菌防卫基因的调控中起重要作用，它通过SA信号转导途径来抑制JA信号转导，是JA信号途径的负调控基因[24]，本研究中W10处理烟草后未能检测到NPR1基因的表达与此相吻合，说明W10引发的促生作用涉及JA信号途径。JA信号通路调节植物生长发育和对胁迫的响应[25]，COI1基因是JA信号途径中1个关键调控基因，目前为止是所有依赖JA信号响应所必需的[26]。本研究发现，COI1经W10诱导处理后表达有所增加，说明促生作用与JA信号通路有关。Thi2.1基因常被作为检测JA信号通路应答的标记基因[27]，但本研究未能检测到该基因的表达，这可能与该基因的表达水平低以及W10菌液诱导强度不够有关，也可能是该基因表达与抗性需要病原生物胁迫，还须进一步研究。
调节植物细胞生长的扩展基因NtEXP2、NtEXP6在枯草芽孢杆菌G1处理烟草1～3 d后能被诱导显著表达，且NtEXP2基因呈组成性表达[11]，这与本研究结果基本一致，但本研究中这2个基因诱导表达较弱，可能是地衣芽孢杆菌W10诱导处理次数较少的缘故，或许W10诱导的促生作用还可能由其他生长相关基因控制，这还须进一步研究。JA信号通路标志基因COI1、调节植物细胞生长的扩展基因NtEXP2、NtEXP6都不同程度地被地衣芽孢杆菌W10诱导表达，为地衣芽孢杆菌W10的促生作用提供了理论依据，也拓宽了这类生物防治菌的应用领域。
参考文献：
[1]Compant S，Duffy B，Nowak J，et al. Use of plant growth-promoting bacteria for biocontrol of plant diseases：principles，mechanisms of action，and future prospects[J]. Applied and Environmental Microbiology，2005，71（9）：4951-4959.
[2]陈志谊，刘永峰，刘邮洲，等. 植物病害生防芽孢杆菌研究进展[J]. 江苏农业学报，2012，28（5）：999-1006.
[3]童蕴慧，徐敬友，陈夕军. 灰葡萄孢拮抗细菌的筛选[J]. 中国生物防治，2000，16（3）：123-126.
[4]唐丽娟，纪兆林，徐敬友，等. 地衣芽孢杆菌W10对灰葡萄孢的抑制作用及其抗菌物质[J]. 中国生物防治，2005，21（3）：203-205.
[5]纪兆林，凌筝，张清霞，等. 地衣芽孢杆菌对苹果轮纹病菌和炭疽病菌的抑制及其对贮藏期苹果轮纹病的防治作用[J]. 果树学报，2008，25（2）：209-214.
[6]童蕴慧，纪兆林，徐敬友，等. 灰葡萄孢拮抗细菌在番茄植物体表的定殖[J]. 中国生物防治，2003，19（2）：78-81.
[7]凌筝，纪兆林，张纪兵，等. 地衣芽孢杆菌W10在苹果和柑橘果实表面的定殖[J]. 果树学报，2009，26（6）：851-854.
[8]纪兆林，唐丽娟，张清霞，等. 地衣芽孢杆菌W10抗菌蛋白的分离纯化及其理化性质研究[J]. 植物病理学报，2007，37（3）：260-264.
[9]童蕴慧，郭桂萍，徐敬友，等. 拮抗细菌对番茄植株抗灰霉病的诱导[J]. 中国生物防治，2004，20（3）：187-189.
[10]Dong H，Delaney T P，Bauer D W，et al. Harpin induces disease resistance in Arabidopsis through the systemic acquired resistance pathway mediated by salicylic acid and the NIM1 gene[J]. Plant Journal，1999，20（2）：207-215. [11]Wang S，Wu H J，Qiao J Q，et al. Molecular mechanism of plant growth promotion and induced systemic resistance to tobacco Mosaic virus by Bacillus spp[J]. Journal of Microbiology and Biotechnology，2009，19（10）：1250-1258.
[12]梁建根，张炳欣，喻景权，等. 植物根围促生细菌（PGPR）对黄瓜生长及生理生化特性的影响[J]. 浙江大学学报：农业与生命科学版，2007，33（2）：202-206.
[13]易有金，肖浪涛，王若仲，等. 内生枯草芽孢杆菌B-001对烟草幼苗的促生作用及其生长动态[J]. 植物保护学报，2007，34（6）：619-623.
[14]刘勇，柯绍英，黄小琴，等. 枯草芽孢杆菌Bs2004菌株的防病促生效果[J]. 中国生物防治，2008，24（增刊1）：46-49.
[15]王美琴，刘慧平，韩巨才. 内生枯草芽孢杆菌Thhy1的促生与定殖力研究[J]. 中国农学通报，2011，27（16）：196-199.
[16]申莉莉，王凤龙，钱玉梅，等. 解淀粉芽孢杆菌Ba33对烟草的促生及抗TMV作用[J]. 吉林农业大学学报，2010，32（4）：383-386.
[17]张艳群，来航线，韦小敏，等. 2株植物促生芽孢杆菌的多向筛选及鉴定[J]. 西北农业学报，2014，23（3）：193-200.
[18]赵静，夏海波，李艳青，等. 根际促生菌YHN对番茄和茄子的促生作用研究[J]. 北方园艺，2014（4）：30-32.
[19]管珺，杨文革，王瑞荣，等. 蜡样芽孢杆菌CMCC63305的促生、抑菌及杀虫作用研究[J]. 安徽农业科学，2010，38（1）：228-230.
[20]秦嗣军，张硕，周文杰，等. 根际促生细菌对东北山樱幼苗光合特性及生长的影响[J]. 果树学报，2014，31（增刊1）：98-102.
[21]王瑞霞，贺运春，赵廷昌，等. 马铃薯环腐病生防菌株P1的鉴定、防病效果及促生作用研究[J]. 植物病理学报，2010，40（1）：66-73.
[22]李祖红，曾嵘，刘芳，等. 一株紫茎泽兰根际细菌分离鉴定及对烟草促生作用研究[J]. 云南农业大学学报：自然科学版，2014，29（4）：602-605.
[23]李梦莎，阎秀峰. 植物的环境信号分子茉莉酸及其生物学功能[J]. 生态学报，2014，34（23）：6779-6788.
[24]Spoel S H，Koornneef A，Claessens S M，et al. NPR1 modulates cross-talk between salicylate-and jasmonate-dependent defense pathways through a novel function in the cytosol[J]. Plant Cell，2003，15（3）：760-770.
[25]朱家红，彭世清. 茉莉酸及其信号传导研究进展[J]. 西北植物学报，2006，26（10）：2166-2172.
[26]Xie D X，Feys B F，James S，et al. COI1：an Arabidopsis gene required for jasmonate-regulated defense and fertility[J]. Science，1998，280（5366）：1091-1094.
[27]Reymond P，Farmer E E. Jasmonate and salicylate as global signals for defense gene expression[J]. Current Opinion in Plant Biology，1998，1（5）：404-411.张文静，肖佳冰，李佳，等. 秸秆覆盖和保水剂对烤烟化学成分的影响[J]. 江苏农业科学，2016，44（5）：155-157.
关键词：地衣芽孢杆菌；烟草；促生作用；促生机制
中图分类号：S476.1；S572.04文献标志码： A文章编号：1002-1302（2016）05-0152-03
芽孢杆菌（Bacillus spp.）是植物病害生物防治研究和应用较多的一类生物防治细菌，其生物防治机制主要有营养和空间位点竞争、产生多种抑菌物质（如脂肽类抗生素、降解胞壁酶类、细菌素、抗菌蛋白、多肽类化合物等）、溶菌作用、促进植物生长、诱导植物抗病性等方面[1-2]。地衣芽孢杆菌（B. licheniformis）W10是笔者从根际筛选获得的1株生物防治细菌，对多种植物病原真菌均有较好的抑制作用，田间防治效果与化学药剂相当，已明确该菌株的防病机理涉及竞争定殖作用、产生抗菌蛋白和诱导植物产生抗病性[3-9]。但该菌株的促生作用尚不清楚。本研究对地衣芽孢杆菌W10在烟草上的促生作用及分子机制进行了初步研究，旨在为拓宽生物防治细菌地衣芽孢杆菌W10的应用领域奠定基础。
1材料与方法
1.1供试烟草和菌株
供试烟草品种三生烟（Nicotiana tabacum L. “Xanthi”）种子由笔者所在实验室提供；生物防治细菌地衣芽孢杆菌（B. licheniformis）W10从番茄根际土壤中分离获得。
1.2培养基
细菌培养基NB：5 g聚蛋白胨、3 g牛肉浸膏、1 g酵母膏、10 g蔗糖、1 L水，pH值7.0，用于W10菌株种子活化和摇瓶培养。水琼脂培养基：15 g琼脂、1 L水，用于烟草种子培养。1/2 MS培养基：4.42 g MS、30 g蔗糖、2 g植物凝胶、1 L水，pH值5.8，用于烟草培养。
1.3W10菌液制备
将活化的W10接种于150 mL NB中，28 ℃、180 r/min条件下培养2 d得到培养菌液，用平板计数法测量浓度，调制成1亿 CFU/mL，作为烟草处理菌液。
1.4烟草根长的测量
将三生烟种子在W10菌液中浸泡6 h，然后用15%次氯酸钠溶液表面消毒10 min，无菌水漂洗3次后，呈直线均匀排列在水琼脂培养基平板上，竖置于26 ℃光照培养箱中培养（16 h/d光照）。根据平板摆放位置距离光源远近，设3个处理，分别为：处理1，距离光源近；处理2，距离光源中等；处理3，距离光源远。每个处理重复3次（平板），每个平板10粒烟草种子，同时设清水对照（CK）。待处理的烟草种子根长至25 mm左右时，测量各处理根长。
1.5烟草株高和鲜质量的测量
将三生烟种子于15%次氯酸钠溶液中消毒10 min，用无菌水漂洗3次后，均匀放入1/2MS平板中，并置于26 ℃光照培养箱中培养（光照时间16 h/d），出芽后幼苗长至高1～2 cm 时将其轻轻从培养基中连根拔出，用W10菌液处理 6 h，后移入含灭菌营养土的盆钵中，置于温室培养，设清水对照。距光源远近设3个处理，每个处理重复3次，每个重复6株烟草。待烟草幼苗三叶一心时测量株高。
上述烟草幼苗长至五叶一心时，用W10菌液浇灌烟草根部，每株10 mL，10 d后测量整株烟草的鲜质量。
1.6基因表达分析
1.6.1烟草总RNA提取和检测W10菌液灌根处理2 d后，取烟草上部嫩叶，采用AxyPrep总RNA提取试剂盒[美国Axygen生物技术（杭州）有限公司]提取烟草叶片总RNA。用琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整性，分光光度计检测RNA的纯度，质量符合要求后计算RNA样品的浓度（D260 nm×稀释倍数×40），RNA样品于-20 ℃保存备用。
1.6.2半定量RT-PCR分析取2 μg RNA作为模板，以Oligo（dT）15为引物，用反转录酶M-mLV（RNase H—）（Promega公司）合成cDNA。取适量反转录产物为模板，进行PCR反应。以在真核生物中高度保守并且组成性表达的EF-1α基因为内参。拟PCR扩增的基因有抗病防卫反应调控基因NPR1[10]，茉莉酸（jasmonic acid，JA）信号通路分子标志基因Thi2.1、COI1，调节植物细胞生长的扩展基因NtEXP2、NtEXP6[11]。基因名称、登录号、上游引物/下游引物、涵盖长度、PCR反应条件等信息见表1。
采用琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物。
2结果与分析
2.1地衣芽孢杆菌W10对烟草根长的影响
从图1可见，地衣芽孢杆菌W10对烟草根生长具有明显的促进作用，其中距离光源近的处理促生作用最明显，比对照根长增加了105.6%，距离光源较远的处理也比对照增长36.0%。
2.2地衣芽孢杆菌W10对烟草株高的影响
由图2可见，经地衣芽孢杆菌W10处理后，烟草株高比对照增加了41.2%～76.5%，距离光源越近，烟草株高不断增加，但促生作用在减少。如近光源处理烟草株高达到了 12 cm，但促生作用只有41.2%；远光源处理株高虽然只有 10 cm，但促生作用达到了76.5%。
2.3地衣芽孢杆菌W10对烟草鲜质量的影响
由图3可知，地衣芽孢杆菌W10处理后，烟草鲜质量明显增加，比对照增加101.9%～114.6%，且各光源距离处理间差异不明显，这可能与烟草五叶一心期进行了1次W10菌液灌根有关，W10菌液灌根促进烟草生长，减小了不同光源距离处理间的差异。 2.4烟草中促生相关基因的表达
从图4可以看出，地衣芽孢杆菌W10菌液处理烟草后，JA信号通路标志基因COI1以及调节植物细胞生长的扩展基因NtEXP2、NtEXP6都能不同程度地被诱导表达，其中COI1、NtEXP2呈组成性本底表达（对照），W10菌液诱导后表达量略有上升。W10菌液处理的烟草中NtEXP6基因表达微弱，但对照检测不到该基因的表达。多次PCR分析并未发现抗病防卫反应调控基因NPR1、JA信号通路标志基因Thi2.1的表达。
3结论与讨论
目前芽孢杆菌对植物促生作用的报道集中在枯草芽孢杆菌（B. subtilis）[12-15]、解淀粉芽孢杆菌（B. amyloliquefaciens）[16-18]、蜡状芽孢杆菌（B. cereus）[19-20]、巨大芽孢杆菌（B. megaterium）[21-22]，涉及蔬菜、果树、小麦、烟草等植物。
而地衣芽孢杆菌的促生作用及机制研究未见报道。本研究发现，地衣芽孢杆菌W10对烟草根长、株高、鲜质量都有明显的促生作用，同时也发现距离光源距离对烟草生长也有一定影响，一般距离光源近的处理生长量较大，这可能是由于近光源位置光照度和温度都较高，有利于烟草植株的发育和生长，与光、温度等环境因子影响植物内源茉莉酸信号的变化[23]有关。本研究中有关根长、株高试验中，只进行了1次W10菌液处理，诱导强度较小，对烟草的促生作用小，从而导致个别处理和对照间差异不显著；而鲜质量试验进行了2次诱导处理，诱导强度较大，对烟草的促生作用也大，所有诱导处理和对照间差异均达到显著水平。因此，地衣芽孢杆菌W10须要多次诱导处理才会具有较好的植物促生作用。
JA和水杨酸（salicylate，SA）信号转导途径之间主要模式是拮抗作用，NPR1是SA信号途径中抗病防卫反应的正调控基因，在许多病原菌防卫基因的调控中起重要作用，它通过SA信号转导途径来抑制JA信号转导，是JA信号途径的负调控基因[24]，本研究中W10处理烟草后未能检测到NPR1基因的表达与此相吻合，说明W10引发的促生作用涉及JA信号途径。JA信号通路调节植物生长发育和对胁迫的响应[25]，COI1基因是JA信号途径中1个关键调控基因，目前为止是所有依赖JA信号响应所必需的[26]。本研究发现，COI1经W10诱导处理后表达有所增加，说明促生作用与JA信号通路有关。Thi2.1基因常被作为检测JA信号通路应答的标记基因[27]，但本研究未能检测到该基因的表达，这可能与该基因的表达水平低以及W10菌液诱导强度不够有关，也可能是该基因表达与抗性需要病原生物胁迫，还须进一步研究。
调节植物细胞生长的扩展基因NtEXP2、NtEXP6在枯草芽孢杆菌G1处理烟草1～3 d后能被诱导显著表达，且NtEXP2基因呈组成性表达[11]，这与本研究结果基本一致，但本研究中这2个基因诱导表达较弱，可能是地衣芽孢杆菌W10诱导处理次数较少的缘故，或许W10诱导的促生作用还可能由其他生长相关基因控制，这还须进一步研究。JA信号通路标志基因COI1、调节植物细胞生长的扩展基因NtEXP2、NtEXP6都不同程度地被地衣芽孢杆菌W10诱导表达，为地衣芽孢杆菌W10的促生作用提供了理论依据，也拓宽了这类生物防治菌的应用领域。
参考文献：
[1]Compant S，Duffy B，Nowak J，et al. Use of plant growth-promoting bacteria for biocontrol of plant diseases：principles，mechanisms of action，and future prospects[J]. Applied and Environmental Microbiology，2005，71（9）：4951-4959.
[2]陈志谊，刘永峰，刘邮洲，等. 植物病害生防芽孢杆菌研究进展[J]. 江苏农业学报，2012，28（5）：999-1006.
[3]童蕴慧，徐敬友，陈夕军. 灰葡萄孢拮抗细菌的筛选[J]. 中国生物防治，2000，16（3）：123-126.
[4]唐丽娟，纪兆林，徐敬友，等. 地衣芽孢杆菌W10对灰葡萄孢的抑制作用及其抗菌物质[J]. 中国生物防治，2005，21（3）：203-205.
[5]纪兆林，凌筝，张清霞，等. 地衣芽孢杆菌对苹果轮纹病菌和炭疽病菌的抑制及其对贮藏期苹果轮纹病的防治作用[J]. 果树学报，2008，25（2）：209-214.
[6]童蕴慧，纪兆林，徐敬友，等. 灰葡萄孢拮抗细菌在番茄植物体表的定殖[J]. 中国生物防治，2003，19（2）：78-81.
[7]凌筝，纪兆林，张纪兵，等. 地衣芽孢杆菌W10在苹果和柑橘果实表面的定殖[J]. 果树学报，2009，26（6）：851-854.
[8]纪兆林，唐丽娟，张清霞，等. 地衣芽孢杆菌W10抗菌蛋白的分离纯化及其理化性质研究[J]. 植物病理学报，2007，37（3）：260-264.
[9]童蕴慧，郭桂萍，徐敬友，等. 拮抗细菌对番茄植株抗灰霉病的诱导[J]. 中国生物防治，2004，20（3）：187-189.
[10]Dong H，Delaney T P，Bauer D W，et al. Harpin induces disease resistance in Arabidopsis through the systemic acquired resistance pathway mediated by salicylic acid and the NIM1 gene[J]. Plant Journal，1999，20（2）：207-215. [11]Wang S，Wu H J，Qiao J Q，et al. Molecular mechanism of plant growth promotion and induced systemic resistance to tobacco Mosaic virus by Bacillus spp[J]. Journal of Microbiology and Biotechnology，2009，19（10）：1250-1258.
[12]梁建根，张炳欣，喻景权，等. 植物根围促生细菌（PGPR）对黄瓜生长及生理生化特性的影响[J]. 浙江大学学报：农业与生命科学版，2007，33（2）：202-206.
[13]易有金，肖浪涛，王若仲，等. 内生枯草芽孢杆菌B-001对烟草幼苗的促生作用及其生长动态[J]. 植物保护学报，2007，34（6）：619-623.
[14]刘勇，柯绍英，黄小琴，等. 枯草芽孢杆菌Bs2004菌株的防病促生效果[J]. 中国生物防治，2008，24（增刊1）：46-49.
[15]王美琴，刘慧平，韩巨才. 内生枯草芽孢杆菌Thhy1的促生与定殖力研究[J]. 中国农学通报，2011，27（16）：196-199.
[16]申莉莉，王凤龙，钱玉梅，等. 解淀粉芽孢杆菌Ba33对烟草的促生及抗TMV作用[J]. 吉林农业大学学报，2010，32（4）：383-386.
[17]张艳群，来航线，韦小敏，等. 2株植物促生芽孢杆菌的多向筛选及鉴定[J]. 西北农业学报，2014，23（3）：193-200.
[18]赵静，夏海波，李艳青，等. 根际促生菌YHN对番茄和茄子的促生作用研究[J]. 北方园艺，2014（4）：30-32.
[19]管珺，杨文革，王瑞荣，等. 蜡样芽孢杆菌CMCC63305的促生、抑菌及杀虫作用研究[J]. 安徽农业科学，2010，38（1）：228-230.
[20]秦嗣军，张硕，周文杰，等. 根际促生细菌对东北山樱幼苗光合特性及生长的影响[J]. 果树学报，2014，31（增刊1）：98-102.
[21]王瑞霞，贺运春，赵廷昌，等. 马铃薯环腐病生防菌株P1的鉴定、防病效果及促生作用研究[J]. 植物病理学报，2010，40（1）：66-73.
[22]李祖红，曾嵘，刘芳，等. 一株紫茎泽兰根际细菌分离鉴定及对烟草促生作用研究[J]. 云南农业大学学报：自然科学版，2014，29（4）：602-605.
[23]李梦莎，阎秀峰. 植物的环境信号分子茉莉酸及其生物学功能[J]. 生态学报，2014，34（23）：6779-6788.
[24]Spoel S H，Koornneef A，Claessens S M，et al. NPR1 modulates cross-talk between salicylate-and jasmonate-dependent defense pathways through a novel function in the cytosol[J]. Plant Cell，2003，15（3）：760-770.
[25]朱家红，彭世清. 茉莉酸及其信号传导研究进展[J]. 西北植物学报，2006，26（10）：2166-2172.
[26]Xie D X，Feys B F，James S，et al. COI1：an Arabidopsis gene required for jasmonate-regulated defense and fertility[J]. Science，1998，280（5366）：1091-1094.
[27]Reymond P，Farmer E E. Jasmonate and salicylate as global signals for defense gene expression[J]. Current Opinion in Plant Biology，1998，1（5）：404-411.张文静，肖佳冰，李佳，等. 秸秆覆盖和保水剂对烤烟化学成分的影响[J]. 江苏农业科学，2016，44（5）：155-157.