探讨转染维A酸受体α(RARα)在肾小管上皮细胞(NRK-52E细胞)缺氧损伤后转分化中的作用。
方法构建过表达RARa慢病毒载体和阴性病毒载体,将NRK-52E细胞分为4组:正常对照组、缺氧模型组、转染组、阴性病毒对照组。转染组、阴性病毒对照组基因干扰72 h后,用2 mg/L嘌呤霉素筛选,再进行缺氧处理。正常对照组不做任何处理。缺氧48 h后采用光镜观察细胞形态变化,采用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测NRK-52E细胞的RARα、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA和蛋白表达。
结果1.光镜下缺氧模型组与阴性病毒对照组NRK-52E细胞均出现萎缩,呈长梭型,类似成纤维细胞形态改变;而转染组NRK-52E细胞萎缩不明显,细胞呈多方形,保留上皮细胞形态。2.与正常对照组比较,缺氧模型组NRK-52E细胞RARα、E-cadherin的mRNA和蛋白表达均显著降低(mRNA:0.58±0.12比1.00±0.00,0.11±0.00比1.00±0.00,t=-0.63、767.30,均P<0.05;蛋白:0.63±0.12比1.62±0.16,0.44±0.22比1.27±0.08,t=8.61、6.19,均P<0.05),而α-SMA的mRNA和蛋白表达均显著升高(3.47±0.83比1.00±0.00,1.39±0.16比0.64±0.10,t=-5.01、-6.91,均P<0.05)。3.缺氧干预后,转染组NRK-52E细胞RARα和E-cadherin的mRNA和蛋白表达均较缺氧模型组(mRNA:4.69±1.34比0.58±0.12,0.23±0.00比0.11±0.00,q=9.13、25.48,均P<0.05;蛋白:1.39±0.19比0.63±0.12,0.87±0.09比0.44±0.22,q=7.92、4.30,均P<0.05)和阴性病毒对照组显著升高(mRNA:4.69±1.34比0.55±0.21,0.23±0.00比0.12±0.01,q=9.20、23.35,均P<0.05;蛋白:1.39±0.19比0.65±0.18,0.87±0.09比0.39±0.21,q=7.71、4.80,均P<0.05),而α-SMA的mRNA和蛋白表达均较缺氧模型组(1.52±0.34比3.47±0.83,0.82±0.13比1.39±0.10,q=4.88、7.50,均P<0.05)和阴性病毒对照组显著降低(1.52±0.34比4.05±0.81,0.82±0.13比1.17±0.10,q=6.33、4.61,均P<0.05)。与缺氧模型组比较,阴性病毒对照组NRK-52E细胞RARα、E-cadherin、α-SMA的mRNA和蛋白表达差异均无统计学意义(均P>0.05)。
结论转染RARα可以减轻肾小管上皮细胞缺氧损伤后的转分化。