【摘 要】
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目的探讨RNA干扰使Adrm1犟因沉默后对大肠癌细胞增殖的影响。方法构建靶向Adrm1基因1的shRNA真核表达载体，转染大肠癌细胞RKO，筛选Adrm1基因沉默的稳定克隆。实验细胞分为3组，即稳定转染Adrm1-shRNA的实验组、仅含大肠癌RKO细胞的空白对照组和转染空载体的阴性对照组，采用Westenl blot法检测Adrm1蛋白的表达水平。通过软琼脂细胞集落形成实验观察3组细胞的集落形成
【机 构】
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浙江大学医学院附属邵逸夫医院生物医学研究（治疗）中心浙江省生物治疗重点实验室,杭州310016,浙江大学医学院附属邵逸夫医院生物医学研究（治疗）中心浙江省生物治疗重点实验室,杭州310016,浙江大学
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目的探讨RNA干扰使Adrm1犟因沉默后对大肠癌细胞增殖的影响。方法构建靶向Adrm1基因1的shRNA真核表达载体，转染大肠癌细胞RKO，筛选Adrm1基因沉默的稳定克隆。实验细胞分为3组，即稳定转染Adrm1-shRNA的实验组、仅含大肠癌RKO细胞的空白对照组和转染空载体的阴性对照组，采用Westenl blot法检测Adrm1蛋白的表达水平。通过软琼脂细胞集落形成实验观察3组细胞的集落形成能力。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法和原位末端标记（TUNEL）法检测细胞的增殖和凋亡水平。应用流式细胞仪检测细胞周期的变化情况。结果 实验组大肠癌RKO细胞中，Adrm1蛋白的表达受到明显抑制。实验组细胞的非贴壁依赖生长能力明显下降，偶见个别集落形成。实验组细胞的凋亡百分率为（12．4±1．1）％，明显高于阴性对照组[（1．3±0.2）％，P〈0．05]。实验组G0／G1期和S／G2期细胞所占的比例分别为（41.2±1.1）％和（58．8±1．1）％，实验组细胞被阻滞在G1期。Adrm1基因沉默能明显增强5－氟尿嘧啶（5-Fu）对大肠癌RKO细胞的生K抑制作用，并引起大肠癌RKO绑胞大量凋亡。结论RNA干扰介导的Adrm1基因沉默能诱导大肠癌细胞发生凋亡并出现细胞周期阻滞．从而抑制肿瘤细胞的增殖。对于Adrm1基因高表达的大肠癌患者，RNA干扰Adrm1基因的表达并结合传统化疗有望成为新的治疗手段。
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