【摘 要】
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目的克隆人IL-10 cDNA的全长序列,构建原核表达载体并诱导其表达.方法无菌条件下静脉采取正常人外周血10 ml.加入等体积的生理盐水稀释后,加入淋巴细胞分离液,离心收集细胞,
【机 构】
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徐州医学院附属医院泌尿外科,徐州医学生物化学与分子生物学研究中心
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目的克隆人IL-10 cDNA的全长序列,构建原核表达载体并诱导其表达.方法无菌条件下静脉采取正常人外周血10 ml.加入等体积的生理盐水稀释后,加入淋巴细胞分离液,离心收集细胞,提取细胞总RNA.以细胞总RNA为模板,进行RT-PCR,克隆出IL-10 cDNA,经双酶切后插入表达载体pMon中,用pMon-IL10重组体转染大肠杆菌DH5α.用萘啶酮酸诱导使重组人IL-10在大肠杆菌中表达,对表达产物进行SDS-PAGE电泳及Western-blot分析.结果人外周血单核细胞经ConA刺激后,IL-1
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