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采用平板涂抹分离法研究了不同分离培养基及样品预处理对高山草甸土放线菌分离的效果。结果表明：土样在120℃干热处理1 h后其悬浮液加0.05%SDS（十二烷基磺酸钠）和6%酵母膏，40℃振荡30 min，能促进放线菌孢子萌发，增加放线菌的分离数量，并抑制杂菌生长，是高山草甸土放线菌分离时理想的预处理方法。改良HV琼脂和高氏1号加重铬酸钾（50 mg/L）培养基是较好的分离培养基。