【摘 要】
：
目的:构建乙型肝炎病毒X基因(HBV X)重组慢病毒表达载体,建立稳定表达HBVX蛋白(HBx)的HepG2细胞系.方法:应用PCR法从质粒pIERES2-EGFP-HBV中扩增X基因片段,克隆至慢病毒载体p
【机 构】
：
广州医学院第五附属医院内一科,广州医学院第一附属医院肝病研究室
【基金项目】
：
广东省科技计划基金资助项目,No.2010B060900092~~
论文部分内容阅读
目的:构建乙型肝炎病毒X基因(HBV X)重组慢病毒表达载体,建立稳定表达HBVX蛋白(HBx)的HepG2细胞系.方法:应用PCR法从质粒pIERES2-EGFP-HBV中扩增X基因片段,克隆至慢病毒载体pZac2.1,应用PCR、酶切和测序鉴定正确后,经病毒包装,感染HepG2细胞,经嘌呤霉素筛选稳定表达细胞株,RT-PCR、免疫组织化学、Western blot鉴定HBx的表达.结果:酶切鉴定和基因序列测定证实长度为489bp的HBx基因成功克隆至慢病毒表达载体pZac2.1-HBx;重组慢病毒经包装、纯化后获得滴度为1×108TU/mL,通过感染HepG2细胞株和嘌呤霉素筛选,8-10d形成生长形态良好的单克隆细胞株HepG2-HBx;RT-PCR鉴定显示细胞株HepG2-HBx在3d,14d,30d和2mo后均可见稳定表达的HBx mRNA;利用免疫组织化学和蛋白免疫印迹法鉴定,细胞株HepG2-HBx可稳定表达HBx蛋白.结论:成功构建了HBV X重组慢病毒载体,获得稳定表达HBx的HepG2细胞系,为进一步研究HBx的生物学功能及致病机制提供细胞模型.
其他文献
放眼初春的街头,从紧身的莱卡裤、七分的牛仔裤到丝缎的迪斯科装扮,无不召唤着你去展示自己曼妙的身材曲线。而积蓄一冬的脂肪却偏要与你作对,从大腿到小腿整整粗了一圈,让你
<正>移情是一个心理学术语,是指"通过对情绪气氛的渲染和交流,自身产生与他人感情相接近的感情体验。"社会心理学家霍夫兰指出,移情就是被引发的情感的共鸣。用通俗的话讲,移
新绩效预算是当今世界上发达国家普遍实行的一种预算管理模式,对促进政府改革和抑制财政资金浪费起到了积极作用。美国、英国、澳大利亚、新西兰等国是绩效预算改革的先行者,
目的探讨影响机械通气患者舒适度的因素并进行分析。方法通过临床观察,采用询问、手势和书写方法与病人进行交流,对病人提出的不舒适因素进行总结。结果机械通气患者不舒适因
目的:了解糖尿病患者消化不良症状与近端胃功能的关系.方法:糖尿病患者44例,对有胃肠症状者进行症状评分,其中有消化不良症状者24例,无胃肠症状及其他脏器并发症者20例,以水
目前我国农村低保标准的测算方法不统一,一些地方低保标准的确定还缺乏应有的科学性与合理性。从我国的经济实力和基本国情出发,确定农村低保标准应以基本生活保障型为主,同
经营性事业单位是公共服务与社会管理职能的重要载体,在国民经济的发展中发挥着重要的作用。然而,由于受到会计核算模式等因素的制约,经营性事业单位在发展中也遇到了一些问
新型的抗TNF-制剂阿达木单抗(Adalimumab)是一种经皮下注射的重组人源性IgG1型抗TNF-单克隆抗体.阿达木单抗因其方便的给药方式、更少的不良事件发生率已成为一种新的生物治
在班级管理过程中,班级管理目标是起点也是关键环节。构建班级管理目标,应从班级组织的特殊性分析入手,弄清班级管理目标的外在约束和内在约束条件,着力解决好班级管理目标构