目的 初步探讨在急性腹腔感染早期肠上皮细胞NOD样受体(NLRs)的表达规律及其对肠屏障的作用.方法 将SD大鼠按随机数字表法分为对照组(n=6)和实验组(n=24),采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备急性腹腔感染模型.于术后2、6、12和24 h各取6只大鼠,采用实时荧光半定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测末端回肠黏膜上NOD2、NOD样受体3(NLRP3)的mRNA表达;蛋白质免疫印迹试验检测天冬氨酸特异性 半胱氨酸蛋白酶1(caspase-1)及紧密连接蛋白的表达;凝胶电泳迁移率(EMSA)实验检测核转录因子-κB(NF-κB)活性;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;原位末端缺刻标记试验(TUNEL)观察肠上皮细胞死亡情况,并用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的葡聚糖溶液检测肠道的通透性.结果 NOD2mRNA表达在术后2h迅速升高达峰值,且明显高于对照组(75.50±13.03比1.00±0.00,P<0.01),术后6h迅速回落,此后缓慢下降;NLRP3 mRNA表达于术后2h降低,随后逐渐升高至12h达峰值,且明显高于对照组(4.03±0.71比1.00±0.00,P<0.05);caspase-1蛋白表达在术后2h即明显高于对照组(3.56±0.14比2.10±0.11,P<0.01),然后呈逐渐增高的趋势;紧密连接蛋白Occludin、ZO-1和Claudin-4的表达分别在术后2~6h即明显低于对照组(2 h Occludin:7.24±1.13比12.72±1.34,6 h ZO-1:0.47±0.09比1.57±0.17,2 h Claudin-4:1.63±0.28比3.40±0.34,P<0.05或P<0.01),随后均逐渐下降;NF-κB活性在术后2h即明显高于对照组(24.85±0.57比12.42±0.73,P<0.01),随后在一个高表达状态下呈缓慢下降趋势;IL-6在术后6h急剧增高达峰值(与对照组比较3088.07±330.03比26.19±7.58,P<0.01),随后缓慢回落;TNF-α于术后2h即明显高于对照组(110.75±19.18比7.86±3.58,P<0.01),最后呈逐渐增高的趋势;随着CLP后时间的延续,肠上皮细胞死亡率在术后2h即明显高于对照组[(0.12±0.02)%比(0.03±0.01)%,P< 0.05],并呈逐渐上升的趋势;肠道通透性随着腹腔感染时间的延长而逐渐增大,与对照组相比从2h开始其差异就有统计学意义[葡聚糖通透率:(35.75±4.66)%比(2.84±0.35)%,P<0.01].相关性分析显示,NLRP3与肠通透性和caspase-1蛋白表达量的相关性较其他指标略高;caspase-1与死亡细胞量、TNF-α和肠通透性显示出较强的相关性;而肠通透性与caspase-1蛋白表达量相关性最高.结论 在腹腔感染早期,NOD2和NLRP3都可能起了一定的作用,NOD2的巨幅波动提示其可能受到机体精确的反馈机制调节,以控制其表达不至于过强或过弱;NLRP3、caspase-1和肠上皮细胞死亡量间的强关联可能暗示了这其中存在某种联系,而肠上皮细胞的死亡对于肠通透性以至维持肠屏障功能等可能与紧密连接蛋白一样有着重要意义。
NOD样受体通路在急性腹腔感染早期对大鼠肠屏障的作用机制初探
【摘 要】
:
目的 初步探讨在急性腹腔感染早期肠上皮细胞NOD样受体(NLRs)的表达规律及其对肠屏障的作用.方法 将SD大鼠按随机数字表法分为对照组(n=6)和实验组(n=24),采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备急性腹腔感染模型.于术后2、6、12和24 h各取6只大鼠,采用实时荧光半定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测末端回肠黏膜上NOD2、NOD样受体3(NLRP3)的mRNA表达;蛋白质免疫印迹试验检测
【机 构】
:
300050天津医院普外科,300121天津市人民医院普外科,天津市大肠肛门病研究所,300121天津市人民医院普外科,天津市大肠肛门病研究所
【出 处】
:
中华危重病急救医学
【发表日期】
:
2013年25期
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