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目的
构建microRNAlet-7a重组慢病毒表达载体，建立稳定表达let-7a的睾丸卵黄囊瘤细胞株(TYST-1)，并探索let-7a过表达后对睾丸卵黄囊瘤(TYST)细胞增殖的影响。
方法根据miRBase数据库let-7a的序列，设计合适的引物序列，利用聚合酶链反应(PCR)钓取目的基因片段，经过扩增、酶切后，与慢病毒载体GV309连接。转化DH5α感受态细胞，阳性克隆进行PCR及测序鉴定。293T细胞中包装慢病毒，利用荧光法测定病毒滴度。将构建好的let-7a慢病毒载体感染睾丸卵黄囊瘤(TYST)细胞，经嘌呤霉素筛选并扩大培养后得到稳定克隆株，建立稳定表达let-7a的TYST-1。用Quantitative real-time PCR(qRT-PCR)检测let-7a表达水平，用Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测let-7a过表达后对TYST细胞增殖的影响。
结果构建的let-7a慢病毒载体经质粒酶切和测序鉴定正确；let-7a慢病毒感染组细胞内let-7a水平比阴性病毒对照组和空白对照组分别提高3.0倍和3.8倍(P<0.05)。CCK-8法细胞增殖试验结果显示，较空白组和阴性病毒组，let-7a慢病毒感染组细胞的增殖能力明显受到抑制(P<0.05)。
结论成功构建let-7a慢病毒载体并感染TYST细胞，获得稳定过表达let-7a的TYST-1；并证实let-7a过表达后抑制了TYST细胞的增殖。