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doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2009.20.046
我国结核病疫情:我国属于全球结核病高负担国家之一,结核病的患病人数在世界各国中居于第2位。疫情严峻的原因与临床诊断技术和新药研制滞后、防治不力、结核杆菌与人类免疫缺陷病毒(HIV)双重感染以及耐药结核病人数的急剧增加等有关。目前诊断肺结核的主要方法是痰涂片染色镜检,结合X线胸片检查,继以结核分枝杆菌培养确认。但是,涂片检查敏感性差,分离培养结核杆菌时间过长,X线检查又往往缺乏特异性,用于基因诊断技术的PCR尚处于发展阶段。因此,建立敏感、特异、快速、低成本的快速检测方法十分重要。现对结核病的快速诊断技术概况加以综述。
结明实验:结明实验(MycoDot)是国内外使用较早、较普遍的结核抗体快速检测试验,即将脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)作为抗原固定于在电泳梳上,再将此附有抗原的电泳梳置于稀释的血清或全血中浸泡,标本中如有LAM抗体,则与梳上LAM抗原相结合,浸入显色液后,抗体金颗粒便会特异性地聚集在抗原抗体复合物上,在梳上附着抗原处形成红色圆形斑点,即为阳性。结核菌细胞壁成分中含有阿拉伯甘露糖,因此只有当患者患活动性结核病时,才会有阳性反应。健康人、既往感染者(结素试验阳性)以及卡介苗接种者都显示为阴性。在入组3个国家1602例患者的临床试验中,结明试验的总敏感性为70.2%,特异性为95.1%。在这一方法中,标本采集方便,方法简单、快速、可靠,可用肉眼判断实验结果,无需特殊实验仪器,便于基层医院推广。
結核病诊断试剂盒:结核病诊断试剂盒(FD)采用结核分枝杆菌的特异性抗原——脂阿拉伯甘露糖(LAM)为固相抗原,并以金溶胶为标记。其原理是将结核杆菌的特异性抗原LAM固定在特制载体上,当被检血清或全血中含有结核杆菌的特异性抗体(LAM-IgG)时,便与载体上的抗原结合为抗原复合物,这种复合物可与标记有“双抗”的金溶胶试剂发生作用,形成紫红色斑点。因此,试验结果呈紫红色斑点者为阳性,无紫红色斑点者为阴性。既往研究表明,FD检测阳性率为80%,特异性为94%,检测结果不受卡介苗接种的影响。FD检测简便、快速,且不需要专门技术和特殊设备,是用于结核病的诊断和鉴别诊断的一项辅助诊断方法,适用于在基层医疗单位推广使用。
斑点金标免疫渗滤法:斑点金标免疫渗滤法(DIGFA)是将固相人型结核分支杆菌蛋白衍生物(PPD)纯化抗原包被在斑点反应板上,其与体液中的抗结核分支杆菌抗体(PPD-IgG)形成复合物,胶体金标记抗人IgG或海藻硫酸多糖(SPA)与复合物结合,形成肉眼可见的红色斑点。既往研究表明,斑点金标免疫渗滤法检测各类血清678份,敏感性为76.8%,特异性为91.5%。但受结核菌或其他分枝杆菌感染及卡介苗接种等影响,也可出现交叉反应。这种方法具有简便、快速,结果易于判读,无需特殊仪器,能进行单个标本的测定,受检患者可及时得到结果等特点,适用于基层医院诊断结核菌感染和进行流行病学调查。
结核杆菌抗体胶体金法诊断试剂盒:结核杆菌抗体胶体金法诊断(TB-DOT)试剂盒是用现代生物技术提纯结核分枝杆菌特异性外膜抗原,应用斑点金免疫渗滤试验(DIGFA)原理,并用定量标准色谱卡技术制作的TB-DOT试剂盒,用于活动性肺内外结核病IgG、IgM、IgA的检测。研究显示的灵敏性和特异性分别为85.5%和93.6%,与国内学者报道灵敏性73.8%、特异性94.1%基本一致,因此,TB-DOT试剂盒是一种灵敏性和特异性较高的试剂盒。
免疫胶体金标记技术:免疫胶体金标记技术(ICS)具有快速、简便、准确的特点,有助于提高诊断,适用于活动性结核病的诊断。这种方法可用于涂片培养阴性但有临床症状的患者,鉴别肺癌与其他肺部疾患,或动态观察结核病化疗效果。但是,目前该方法检测成本较高,尚难用于结核病初筛及在基层医疗单位普及应用。
我国结核病疫情:我国属于全球结核病高负担国家之一,结核病的患病人数在世界各国中居于第2位。疫情严峻的原因与临床诊断技术和新药研制滞后、防治不力、结核杆菌与人类免疫缺陷病毒(HIV)双重感染以及耐药结核病人数的急剧增加等有关。目前诊断肺结核的主要方法是痰涂片染色镜检,结合X线胸片检查,继以结核分枝杆菌培养确认。但是,涂片检查敏感性差,分离培养结核杆菌时间过长,X线检查又往往缺乏特异性,用于基因诊断技术的PCR尚处于发展阶段。因此,建立敏感、特异、快速、低成本的快速检测方法十分重要。现对结核病的快速诊断技术概况加以综述。
结明实验:结明实验(MycoDot)是国内外使用较早、较普遍的结核抗体快速检测试验,即将脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)作为抗原固定于在电泳梳上,再将此附有抗原的电泳梳置于稀释的血清或全血中浸泡,标本中如有LAM抗体,则与梳上LAM抗原相结合,浸入显色液后,抗体金颗粒便会特异性地聚集在抗原抗体复合物上,在梳上附着抗原处形成红色圆形斑点,即为阳性。结核菌细胞壁成分中含有阿拉伯甘露糖,因此只有当患者患活动性结核病时,才会有阳性反应。健康人、既往感染者(结素试验阳性)以及卡介苗接种者都显示为阴性。在入组3个国家1602例患者的临床试验中,结明试验的总敏感性为70.2%,特异性为95.1%。在这一方法中,标本采集方便,方法简单、快速、可靠,可用肉眼判断实验结果,无需特殊实验仪器,便于基层医院推广。
結核病诊断试剂盒:结核病诊断试剂盒(FD)采用结核分枝杆菌的特异性抗原——脂阿拉伯甘露糖(LAM)为固相抗原,并以金溶胶为标记。其原理是将结核杆菌的特异性抗原LAM固定在特制载体上,当被检血清或全血中含有结核杆菌的特异性抗体(LAM-IgG)时,便与载体上的抗原结合为抗原复合物,这种复合物可与标记有“双抗”的金溶胶试剂发生作用,形成紫红色斑点。因此,试验结果呈紫红色斑点者为阳性,无紫红色斑点者为阴性。既往研究表明,FD检测阳性率为80%,特异性为94%,检测结果不受卡介苗接种的影响。FD检测简便、快速,且不需要专门技术和特殊设备,是用于结核病的诊断和鉴别诊断的一项辅助诊断方法,适用于在基层医疗单位推广使用。
斑点金标免疫渗滤法:斑点金标免疫渗滤法(DIGFA)是将固相人型结核分支杆菌蛋白衍生物(PPD)纯化抗原包被在斑点反应板上,其与体液中的抗结核分支杆菌抗体(PPD-IgG)形成复合物,胶体金标记抗人IgG或海藻硫酸多糖(SPA)与复合物结合,形成肉眼可见的红色斑点。既往研究表明,斑点金标免疫渗滤法检测各类血清678份,敏感性为76.8%,特异性为91.5%。但受结核菌或其他分枝杆菌感染及卡介苗接种等影响,也可出现交叉反应。这种方法具有简便、快速,结果易于判读,无需特殊仪器,能进行单个标本的测定,受检患者可及时得到结果等特点,适用于基层医院诊断结核菌感染和进行流行病学调查。
结核杆菌抗体胶体金法诊断试剂盒:结核杆菌抗体胶体金法诊断(TB-DOT)试剂盒是用现代生物技术提纯结核分枝杆菌特异性外膜抗原,应用斑点金免疫渗滤试验(DIGFA)原理,并用定量标准色谱卡技术制作的TB-DOT试剂盒,用于活动性肺内外结核病IgG、IgM、IgA的检测。研究显示的灵敏性和特异性分别为85.5%和93.6%,与国内学者报道灵敏性73.8%、特异性94.1%基本一致,因此,TB-DOT试剂盒是一种灵敏性和特异性较高的试剂盒。
免疫胶体金标记技术:免疫胶体金标记技术(ICS)具有快速、简便、准确的特点,有助于提高诊断,适用于活动性结核病的诊断。这种方法可用于涂片培养阴性但有临床症状的患者,鉴别肺癌与其他肺部疾患,或动态观察结核病化疗效果。但是,目前该方法检测成本较高,尚难用于结核病初筛及在基层医疗单位普及应用。