【摘 要】
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目的:建立从少量原代培养滑膜细胞中同时提取微量总RNA和总蛋白质的方法.方法:向5×105原代成纤维样滑膜细胞(FLS)中加入0.3 ml的TRIzolTM试剂经过改良抽提总RNA;同时将抽提总RNA剩下的中下两相,用异丙醇-盐酸胍-无水乙醇抽提蛋白质.另外将FLS细胞标本分别采用经典的异硫氰酸胍-苯酚-氯仿一步法(AGPC)和分子克隆实验手册介绍的十二烷基硫酸钠(SDS)-裂解法抽提总RNA和蛋白质作为对照.检测所提总RNA和蛋白质的纯度、完整性和生物学行为功能.结果:AGPC和TRIzolTM试剂提取
【机 构】
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郑州大学第一附属医院骨科,郑州450052;中国人民解放军陆军特色医学中心陆军特殊职业疾病防控研究室,重庆400042;中国人民解放军陆军特色医学中心陆军特殊职业疾病防控研究室,重庆400042;郑州
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目的:建立从少量原代培养滑膜细胞中同时提取微量总RNA和总蛋白质的方法.方法:向5×105原代成纤维样滑膜细胞(FLS)中加入0.3 ml的TRIzolTM试剂经过改良抽提总RNA;同时将抽提总RNA剩下的中下两相,用异丙醇-盐酸胍-无水乙醇抽提蛋白质.另外将FLS细胞标本分别采用经典的异硫氰酸胍-苯酚-氯仿一步法(AGPC)和分子克隆实验手册介绍的十二烷基硫酸钠(SDS)-裂解法抽提总RNA和蛋白质作为对照.检测所提总RNA和蛋白质的纯度、完整性和生物学行为功能.结果:AGPC和TRIzolTM试剂提取的总RNA的18 S带和28 S带清晰可见,且28 S带比18 S带亮度强2～3倍,带与带之间无拖尾现象,A260/A280值均在1.8以上,含量18.5μg以上.检测两种方法所提总RNA的IL-1β和TNF-αmRNA表达,显示丰度高且两种方法的差异不明显.用总RNA抽提剩下的中下两相提取的蛋白质,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测,蛋白质分离效果好,无杂质和蛋白降解,A280/A260值均在1.8以上,含量80μg以上.免疫印迹法对白介素-1β和肿瘤坏死因子-α蛋白质分析,均可见一条清晰的特异带,与常规SDS裂解液提取的蛋白质结果相同.结论:本研究建立了从FLS原代细胞中同时提取微量总RNA和总蛋白质的方法,得率高,纯度好,具有化学完整性和生物反应能力.
其他文献
目的:探讨脊柱受累的SAPHO综合征(滑膜炎-痤疮-脓疱病-骨质增生-骨炎)患者临床特点.方法:回顾性分析2013年1月至2020年10月住院诊治的48例SAPHO综合征患者的临床资料,根据脊柱受累与否分为脊柱型和非脊柱型,分析两组患者的一般特点、临床表现、影像学表现、实验室及病理学检查结果.结果:48例SAPHO综合征患者中脊柱型32例(66.7％)、非脊柱型16例(33.3％);与非脊柱型相比,脊柱型患者年龄偏大[(54.5±10.8)vs.(48.6±10.3)岁,P<0.05]、更多出现椎体部位疼
目的:探究基于加涅理论的带教方法在普外科护生带教中的应用.方法:选择2019年1月至2021年8月来我院普外科实习的70名护生作为研究对象,按照随机数表法,分为对照组和实验组,每组各35名.对照组选择常规的带教方法,实验组在对照组的基础上采用基于加涅理论的带教方法.对比两组护生专科理论、操作成绩及对带教老师的满意度.结果:实验组的专科理论及操作成绩均显著高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05);实验组的护生对带教老师总满意度(98.33％)显著高于对照组(78.33％)(P＜0.05).结论:基于加
目的:探讨基于学习金字塔理论的TBL教学法在胃肠外科护生教学中的应用效果.方法:选取2019年4月至2021年4月我院胃肠外科40名实习护生,按照摸球将其分为对照组和实验组,各20名.对照组采用传统教学法,实验组采用基于学习金字塔理论的TBL教学法.比较两组护生理论、操作考核成绩以及临床综合能力.结果:实验组护生理论和操作考核成绩以及临床综合能力各条目评分均高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:基于学习金字塔理论的TBL教学法相比传统教学法更能够提高护生实习效果.
目的:探究在心血管内科护理教学中实施体验式教学法的效果.方法:将2018年3月至2020年3月进入我院心血管内科实习的100名实习护生作观察目标,按照随机数字表法分为对照组(n=50)和实验组(n=50).对照组采用传统教学法,实验组采用在传统教学的基础上实施体验式教学法.比较两组考核成绩,以及护理专业核心胜任力(观察力、沟通能力、解决问题能力、持续学习能力).结果:实验组考核成绩以及护理专业核心胜任力评价均优于对照组(P＜0.05).结论:在心血管内科护理教学中应用体验式教学法效果优异,值得推广.
目的:基于问题学习(PBL)教学法联合微课教学在修复重建手外科护理带教中的应用效果.方法:选取在我院修复重建手外科实习的2016级30名护生为对照组,采用传统教学方式.选取在我院修复重建手外科实习的2017级36名护生为实验组,采用PBL联合微课教学.结果:实验组的专科理论成绩、护理操作成绩、处理护理事件能力高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).实验组对学习效果、教学模式、临床思维、解决问题能力方面的满意度高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:PBL联合微课教学能够提高修复重建手外科
通过对医学研究生学位论文盲审结果进行分析,发现科研型硕士研究生和临床型硕士研究生毕业论文质量差异不明显,而两种类型博士研究生毕业论文在科研水平上存在较大差异,提出了对临床型博士研究生提出更高培养目标、“双导师制”、开展临床科研等培养建议.
目的:探讨非暴力沟通对提升医学研究生共情能力的应用效果.方法:选取192名研究生为培训对象,对其进行非暴力沟通培训,比较培训前后效果.结果:培训后,研究生共情和积极心理资本得分比培训前明显提高(P＜0.05).结论:非暴力沟通培训可以提高医学研究生的共情能力和心理资本,从而促进医学研究生人文教育的发展.
股骨头骨骺滑脱(slipped capital femoral epiphy-sis, SCFE)是多发生于儿童的一种髋关节疾病,主要表现为股骨头骨骺相对干骺端向后向下移位,而骨骺仍位于髋臼内[1].股骨头骨骺滑脱多发生于10～14岁处于快速发展时期的儿童,男性多见,男女比例约为2?1.在美国,SCFE发病率为1.8/10000.SCFE起病隐匿,多数有明显外伤史,临床表现为跛行,髋关节疼痛伴活动受限,甚至有时膝关节疼痛为唯一症状.早期明确诊断给临床医师带来极大的挑战,患儿往往因误诊漏诊错过黄金治疗时间,
目的:观察以病例为基础的教学联合翻转课堂在心血管内科实习护士培养中的应用效果.方法:以2019年11月至2021年10月我院67名实习护士为研究对象,分为实验组和对照组.对照组采用翻转课堂教学.实验组采用以病例为基础的教学联合翻转课堂教学.观察并比较两组实习护士带教1个月后的理论知识得分、实际操作得分、不良事件发生率.结果:带教1个月,实验组实习护士理论知识得分、实际操作得分均高于对照组,不良事件发生率低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:以病例为基础的教学联合翻转课堂在心血管内科实习护士培
目的:比较全膝关节置换术中静脉或局部两种给药方式应用糖皮质激素术后早期的镇痛效果和安全性.方法:2018年7月至10月101例行单侧全膝关节置换手术的膝骨关节炎患者按照糖皮质激素的给药方式不同随机分成三组,即静脉激素组(33例)、局部激素组(33例)、空白对照组(35例),三组患者在围手术期其他多模式镇痛方案相同的前提下,比较手术后7 d内不同时间段不同状态的疼痛评分(VAS)、实验室指标(C反应蛋白、白介素-6等)、肢体肿胀程度及恶心、呕吐发生率;比较三组患者手术后的空腹血糖波动、血白细胞计数、切口感染