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目的
研究let-7e对LPS诱导的人原代单核细胞产生的TNF-α表达的影响及其机制。
方法用全血分离人原代单核细胞，流式细胞术检测单核细胞表面标记CD14；let-7e mimics或mimics NC瞬转原代单核细胞24 h、36 h、48 h，qRT-PCR和免疫荧光法检测其转染效率；采用1 mg/L LPS刺激原代单核细胞1 h、3 h、6 h、12 h后，ELISA法检测细胞培养上清中TNF-α的浓度，筛选出LPS最佳刺激时间；qRT-PCR法及ELISA法评估let-7e对LPS诱导原代单核细胞产生TNF-α的影响；Western blot法检测瞬转let-7e mimics后EZH2的表达水平以及瞬转siEZH2后NF-κB p65、ARFGAP1和Arfaptin2的表达水平。
结果CD14＋细胞大于70%；免疫荧光结果显示miRNA模拟物可以转染原代单核细胞，转染率约为70%；let-7e mimics转染原代单核细胞24 h，细胞内即可表达较高水平的let-7e；LPS刺激原代单核细胞12 h即可产生较高水平的TNF-α。ELISA结果证实let-7e mimics显著抑制LPS诱导的TNF-α的产生，同时在mRNA水平也得到一致的结果；Western blot结果显示let-7e mimics组EZH2的水平明显低于let-7e mimics NC组，沉默EZH2后胞核中NF-κB p65显著下调，沉默EZH2后囊泡转运调节蛋白ARFGAP1和Arfaptin2的表达显著下降。
结论在原代单核细胞中，let-7e显著抑制LPS诱导的TNF-α的表达；其机制可能是let-7e靶向作用EZH2进而调节NF-κB的活性及囊泡转运相关蛋白ARFGAP1和Arfaptin2的表达水平。