【摘 要】
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目的 观察靶向抑制表皮生长因子受体(EGFR)联合阻断Hedgehog信号通路对胰腺癌细胞增殖及凋亡的协同作用,探讨二者间的协同作用机制.方法 设计并合成针对人EGFR基因特异性siRN
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目的 观察靶向抑制表皮生长因子受体(EGFR)联合阻断Hedgehog信号通路对胰腺癌细胞增殖及凋亡的协同作用,探讨二者间的协同作用机制.方法 设计并合成针对人EGFR基因特异性siRNA,构建慢病毒pFU-GW-RNAi载体,感染人胰腺癌Panc-1细胞,获得稳定转染细胞株.Real time PCR检测Shh和Gli1的表达情况；克隆形成实验和MTT法检测细胞增殖情况；流式细胞技术检测细胞凋亡情况；Western印迹方法检测ERK和AKT磷酸化水平变化；裸鼠移植瘤模型检测移植瘤生长抑制情况.结果 慢病毒介导的RNAi显著抑制Panc-1细胞EGFR的表达；靶向抑制EGFR后Panc-1细胞对环巴明的敏感性显著增加,细胞增殖能力下降,其半数抑制剂量(IC50)从(2.978±0.336) μmol/L下降到(1.698士0.057)μmol/L,P＜0.05;联合处理组细胞早期凋亡比率高达38.75％,显著高于单独抑制EGFR组(17.65％)及对照组(3.02％),P＜0.05；裸鼠移植瘤实验结果显示联合处理组移植瘤体积(394.8±87.5)mm3显著低于抑制EGFR组(594.7士86.1)mm3和单独应用环巴明处理组(771.3±82.9) mm3；克隆形成实验结果显示联合处理可以进一步抑制细胞增殖；抑制EGFR后胰腺癌细胞ERK和AKT磷酸化水平较对照组显著降低,联合应用环巴明处理后二者磷酸化水平均进一步下降.结论 靶向抑制EGFR联合环巴明处理后胰腺癌细胞体内外增殖能力均进一步被抑制,细胞凋亡率进一步增加；其协同机制可能部分与调控ERK和AKT磷酸化水平相关.
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