【摘 要】
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卵黄原蛋白(vitellogenin,Vg)是昆虫血液中发现最早的蛋白质,对于昆虫的繁殖至关重要.以家蚕Vg基因(Bm Vg)的部分序列构建原核表达载体,转化E.coil BL21(DE3)菌株,在20℃条件
【机 构】
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家蚕基因组生物学国家重点实验室,农业部蚕桑学重点实验室,西南大学,重庆400716
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卵黄原蛋白(vitellogenin,Vg)是昆虫血液中发现最早的蛋白质,对于昆虫的繁殖至关重要.以家蚕Vg基因(Bm Vg)的部分序列构建原核表达载体,转化E.coil BL21(DE3)菌株,在20℃条件下用0.6 mmol/L IPTG进行诱导表达,表达产物经镍柱亲和层析纯化得到家蚕卵黄原蛋白BmVg的肽蛋白.以BmVg肽蛋白为抗原制备的兔源多克隆抗体效价＞1∶512 000.采用硫酸铵分级沉淀和阴离子交换层析的纯化方法,从家蚕化蛹初期的血液中纯化获得天然的BmVg蛋白,并用制备的多克隆抗体进行Western blotting检测,鉴定此纯化的天然蛋白质为BmVg蛋白.建立的BmVg分离纯化技术将有助于进一步研究BmVg的合成、转运及利用机制.
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