【摘 要】
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目的探讨单个CD34+CD38-Lin-细胞在体外培养体系中的生存和增殖能力。方法用免疫磁珠从脐带血单个核细胞中分选出Lin-细胞,然后用流式细胞仪筛选出CD34+CD38-Lin-细胞,并由流
【机 构】
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中国医学科学院,北京协和医学院,血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室
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目的探讨单个CD34+CD38-Lin-细胞在体外培养体系中的生存和增殖能力。方法用免疫磁珠从脐带血单个核细胞中分选出Lin-细胞,然后用流式细胞仪筛选出CD34+CD38-Lin-细胞,并由流式细胞仪将单个CD34+CD38-Lin-细胞直接放入培养孔中进行培养。培养基中分别加细胞因子Shh、BMP-4或Jagged-1作为实验组,未加细胞因子的以等量PBS作为对照。应用细胞计数法、集落培养计数法检测不同培养条件下各组细胞数量的变化及集落形成能力的差异。结果培养第3天,各组均能见到单个细胞的分裂倍增现象。培养1周后,各实验组的细胞存活率均高于对照组,顺序为Jagged-1组>BMP-4组>Shh组>对照组,而每孔细胞数的顺序为Jagged-1组>BMP-4组>对照组;实验组中每孔细胞数为0的孔数明显低于对照组,尤其是Jagged-1组,而实验组每孔细胞数多于17的孔数高于对照组,其中BMP-4组最高。实验组的每孔集落数明显高于对照组,实验组之间的差异并不明显。另外,单个细胞集落培养后能形成红系爆式集落及粒细胞、单核细胞、粒-单核细胞集落形成单位等各式集落。结论单个CD34+CD38-Lin-细胞能够单独完成生存、自我更新及增殖等过程,而添加细胞因子Shh、BMP-4、Jagged-1能够增强其上述能力,显示微环境的重要性。单个CD34+CD38-Lin-细胞只能形成一种细胞集落,说明微环境对于维持CD34+CD38-Lin-细胞群的全能性必不可少。
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