【摘 要】
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目的 探讨缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）诱导肝癌细胞中干细胞标志物CD133表达的分子机制及意义。方法 将HepG2细胞随机分为空白对照组、对照组和实验组，空白对照组HepG2细胞不做转染，对照组和实验组HepG2细胞分别转染空载体慢病毒pHBLV-ZsGreen-Puro和HIF-1α高表达慢病毒pHBLV-HIF1A-3flag-ZsGreen-Puro。使用荧光显微镜观察对照组和实验组细
【基金项目】
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新乡医学院第一附属医院博士科研项目启动基金（编号：10243）;新乡医学院第一附属医院青年培育基金项目（编号：QN-2020-B01）； 河南省医学科技攻关（联合共建）项目（编号：LHGJ20190453）；
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目的 探讨缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）诱导肝癌细胞中干细胞标志物CD133表达的分子机制及意义。方法 将HepG2细胞随机分为空白对照组、对照组和实验组，空白对照组HepG2细胞不做转染，对照组和实验组HepG2细胞分别转染空载体慢病毒pHBLV-ZsGreen-Puro和HIF-1α高表达慢病毒pHBLV-HIF1A-3flag-ZsGreen-Puro。使用荧光显微镜观察对照组和实验组细胞中绿色荧光蛋白（GFP）的表达，并计算转染效率；采用Western blot法检测3组细胞中HIF-1α蛋白及蛋白激酶B（Akt）/核因子-κB（NF-κB）信号通路蛋白磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、Akt、p-p65、p65蛋白的相对表达量，流式细胞术检测对照组和实验组CD133阳性细胞率。另取实验组细胞随机分为HepG2-HIF-1α组、Akt激酶抑制剂组和NF-κB信号通路抑制剂组，Akt激酶抑制剂组和NF-κB信号通路抑制剂组细胞分别给予终浓度为0.4、0.8、1.6、3.2、6.3、12.5、25.0μmol·L-1 Akt激酶抑制剂及终浓度为3.0、6.0、12.5、25.0、50.0、100.0、200.0、400.0μmol·L-1 NF-κB信号通路抑制剂干预；采用四甲基偶氮唑盐法检测Akt激酶抑制剂组和NF-κB信号通路抑制剂组细胞活力，流式细胞术检测HepG2-HIF-1α组、Akt激酶抑制剂组和NF-κB信号通路抑制剂组CD133阳性细胞率的变化。结果 对照组和实验组GFP阳性细胞比例显著高于空白对照组（P<0.05）;对照组与实验组GFP阳性细胞比例比较差异无统计学意义（P>0.05）。实验组细胞中HIF-1α相对表达量显著高于空白对照组及对照组（P<0.05）;空白对照组与对照组细胞中HIF-1α相对表达量比较差异无统计学意义（P>0.05）。对照组和实验组CD133阳性细胞率分别为（4.42±0.29）%、（15.43±0.41）%,实验组CD133阳性细胞率显著高于对照组（t=22.160,P<0.05）。实验组细胞中p-Akt/Akt、p-p65/p65显著高于对照组（P<0.05）。0.4、0.8、1.6、3.2、6.3、12.5、25.0μmol·L-1Akt激酶抑制剂组细胞活力比较差异无统计学意义（F=1.301,P>0.05）;3.0、6.0、12.5、25.0、50.0、100.0、200.0、400.0μmol·L-1 NF-κB信号通路抑制剂组细胞活力比较差异无统计学意义（F=2.300,P>0.05）。Akt激酶抑制剂组和NF-κB信号通路抑制剂组CD133阳性细胞率低于HepG2-HIF-1α组（t=10.17 0、8.932,P<0.05）;Akt激酶抑制剂组与NF-κB信号通路抑制剂组CD133阳性细胞率比较差异无统计学意义（t=1.745,P>0.05）。结论 HIF-1α可通过Akt/NF-κB信号通路促进肝癌细胞中干细胞标志物CD133的表达，增加肝癌细胞的干细胞特性。
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