【摘 要】
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目的:研究糖尿病小鼠肾小球及条件永生性人足细胞C末端Src激酶(Csk)的表达变化,探讨Csk在高糖诱导足细胞骨架重构中的作用.方法:(1)体内实验:健康雄性C57BL/6小鼠12只,按随机数字表法分为对照组和糖尿病组,采用尾静脉注射链脲佐菌素(STZ)制备1型糖尿病模型,于实验第12周留取两组小鼠肾组织,采用免疫荧光法观察Csk在肾小球的表达及分布,实时荧光定量PCR及Western印迹法检测肾小球Csk mRNA及蛋白表达变化.(2)体外实验:取条件永生性人足细胞培养,分为正常葡萄糖组(NG组:5mm
【机 构】
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武汉大学人民医院肾内科,武汉430060
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目的:研究糖尿病小鼠肾小球及条件永生性人足细胞C末端Src激酶(Csk)的表达变化,探讨Csk在高糖诱导足细胞骨架重构中的作用.方法:(1)体内实验:健康雄性C57BL/6小鼠12只,按随机数字表法分为对照组和糖尿病组,采用尾静脉注射链脲佐菌素(STZ)制备1型糖尿病模型,于实验第12周留取两组小鼠肾组织,采用免疫荧光法观察Csk在肾小球的表达及分布,实时荧光定量PCR及Western印迹法检测肾小球Csk mRNA及蛋白表达变化.(2)体外实验:取条件永生性人足细胞培养,分为正常葡萄糖组(NG组:5mmol/L葡萄糖)、高渗组(MA组:5mmol/L葡萄糖,25mmol/L甘露醇)、高糖组(HG组:30mmol/L葡萄糖)、高糖+Csk siRNA转染组(HG+Csk siRNA组),同体内实验方法观察足细胞Csk mRNA及蛋白表达;同时采用异硫氰酸荧光素(FITC)-鬼笔环肽(Phalloidin)染色观察足细胞骨架改变.结果:(1)体内实验结果显示,肾小球Csk主要沿毛细血管袢分布;与对照组相比,糖尿病组小鼠肾小球Csk蛋白和mRNA表达增加(P＜0.01).(2)体外实验,HG组足细胞Csk mRNA及蛋白表达较NG组增加(P＜0.05),足细胞出现骨架重构;Csk siRNA转染足细胞可下调Csk表达,减轻高糖诱导的足细胞骨架重构,降低F-actin评分(P＜0.05).结论:高糖可通过诱导Csk表达上调参与足细胞骨架重构.
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