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目的
为改善虾青素(ATX)水溶性差等问题,使用Fe3O4纳米颗粒(NPs)包封ATX,通过体外培养皮层神经元细胞评价其靶向聚集性。
方法首先利用改良的高温热解法制备Fe3O4纳米颗粒,并利用疏水相互作用制备出内包封ATX而表面分子末端修饰聚乙二醇(PEG)的虾青素纳米载药颗粒(ATX-NPs),同时为了增强神经元细胞的靶向作用,利用碳化二亚胺法进一步耦联转铁蛋白。通过透射电镜(TEM)观察纳米颗粒形态,动态光散射(DLS)测定其粒径及电势大小。体外实验中,采用16~18 d孕龄C57BL/6小鼠胚胎的大脑皮层培育原代神经元细胞,用乳酸脱氢酶(LDH)法测定ATX-NPs对神经元细胞损伤的影响,其次分别采用TEM、共聚焦显微镜(LSCM)及流式细胞术分析ATX-NPs对神经元细胞的靶向聚集性,应用SPSS 25.0软件进行分析。
结果TEM观察可见,制备的ATX-NPs呈近似球形,DLS结果显示,粒径大小约为21 nm,zeta电位约为-28.8 mV。LSCM显示在24 h内ATX-NPs在神经元细胞胞质内有较多聚集。神经元培养基中加入ATX-NPs共同培养24 h后,TEM观察到ATX-NPs通过转铁蛋白靶向神经元内吞形成的内涵体,同时流式细胞术也明确了ATX-NPs聚集于神经元细胞内,LDH法检测结果表明,不同浓度的ATX-NPs未使培养液中的LDH发生明显变化(F=0.610,P>0.05)。
结论耦联转铁蛋白的ATX-NPs有良好的稳定性及生物相容性,并能够靶向聚集于神经元细胞。