【摘 要】
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目的观察慢病毒介导的突变型单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-sr39tk)及野生型HSV-tk对T细胞的体外杀伤作用,比较HSV-sr39tk/更昔洛韦(GCV)、HSV-sr39tk/阿昔洛韦(ACV)、HSV-tk/GCV
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目的观察慢病毒介导的突变型单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-sr39tk)及野生型HSV-tk对T细胞的体外杀伤作用,比较HSV-sr39tk/更昔洛韦(GCV)、HSV-sr39tk/阿昔洛韦(ACV)、HSV-tk/GCV、HSV-tk/ACV对T细胞存活率的影响.方法采用改良的磷酸钙沉淀法将包装质粒、包膜蛋白质粒和含目的基因的转移质粒共转染293T包装细胞,收集的病毒上清感染T细胞后,分别与不同浓度梯度的前体药物GCV和ACV作用4 d后,MTT法测定细胞存活率.结果共转染293T细胞后获得较高滴度的慢病毒(2×106IU/ml).前体药物GCV和ACV浓度在0～10.0μmol/L时转染HSV-sr39tk细胞(39tk+T细胞)存活率下降比较明显,GCV组细胞存活率由(96.04±3.23)%下降为(36.76 ±4.38)%,ACV组细胞存活率由(97.31±4.61)%下降为(43.75±8.99)%,而GCV和ACV浓度大于10.0μmol/L时,39tk+T细胞存活率下降趋势则减缓.统计显示39tk+T细胞对GCV、ACV均有敏感性(P值均＜0.05);转染HSV-tk T细胞(tk+T细胞)对GCV有敏感性(P＜0.05),而对ACV不具有敏感性(P＞0.05);同一浓度时39tk+T细胞+GCV与tk+T细胞+GCV两组间T细胞存活率差异具有统计学意义(P＜0.05).结论慢病毒载体可高效、稳定地感染T细胞,同时不影响细胞的增殖,与野生型HSV-tk基因比较,表达突变型HSV-sr39tk的T细胞对GCV具有更高的敏感性,而且对ACV也具有敏感性.
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