【摘 要】
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本研究利用RT-PCR技术扩增禽源H1N1亚型猪流感病毒（Swine influenza virus,SIV）的HA1基因片段,将其连接至pCold-TF载体上,菌液鉴定为阳性的克隆经测序验证正确后,提取质粒转化
【机 构】
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中国农业科学院上海兽医研究所,山东农业大学动物科技学院
【基金项目】
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国家青年自然科学基金（31201916）, 上海市自然科学基金青年项目（12ZR1453500）, 中央级公益性科研院所基本科研业务费项目（2015JB07）, 中国农业科学院创新工程科研团队“动物流感病毒病原生态学”项目
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本研究利用RT-PCR技术扩增禽源H1N1亚型猪流感病毒（Swine influenza virus,SIV）的HA1基因片段,将其连接至pCold-TF载体上,菌液鉴定为阳性的克隆经测序验证正确后,提取质粒转化至高表达的表达宿主菌BL21（DE3）中,经IPTG诱导并大量表达目的蛋白。表达产物经过纯化及SDS-PAGE电泳分析,表明重组蛋白以可溶性形式在上清中大量表达,大小约90 kDa,且在15℃、0.8 mmol/L IPTG条件下诱导24 h表达效果最好。通过Ni柱纯化后,经Western blo
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