【摘 要】
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目的研究长链非编码RNA（lncRNA）NEF对绝经后骨质疏松症（PMOP）小鼠T细胞免疫功能的调节机制。方法使用Balb/c小鼠建立去卵巢模型（OVX，模拟PMOP）（46只），设立假手术（sham）对照组（16只），从这两组小鼠中用随机数字表法各选6只安乐死后分离培养骨髓间充质干细胞（BMSCs）；构建NEF的重组表达载体（pIRSE2-NEF）并转染BMSCs，使用RT-qPCR检测sham
【机 构】
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浙江中医药大学附属温州中医院老年病科，温州 325000,浙江中医药大学附属温州中医院内分泌科，温州 325000,浙江中医药大学附属温州中医院老年病科，温州 325000,浙江中医药大学附属温州中医
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目的研究长链非编码RNA（lncRNA）NEF对绝经后骨质疏松症（PMOP）小鼠T细胞免疫功能的调节机制。
方法使用Balb/c小鼠建立去卵巢模型（OVX，模拟PMOP）（46只），设立假手术（sham）对照组（16只），从这两组小鼠中用随机数字表法各选6只安乐死后分离培养骨髓间充质干细胞（BMSCs）；构建NEF的重组表达载体（pIRSE2-NEF）并转染BMSCs，使用RT-qPCR检测sham组、OVX组和pIRSE2-NEF组的BMSCs细胞中的NEF和miR-21水平；荧光素酶基因报告实验验证NEF和miR-21的结合作用。将剩余的40只OVX小鼠分为4组，包括OVX组（10只），pIRSE2-NEF注射组（pIRSE2-NEF组，10只），pIRSE2-NEF联合PD-1抑制剂组（pIRSE2-NEF+PD-L1-IN-1组，10只），pIRSE2-NEF联合miR-21拟似物（mimic）组（pIRSE2-NEF+mimic组，10只）。sham组剩余的10只小鼠作为对照组。ELISA检测外周血IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-13、PD-1/PD-1L信号水平，流式细胞术检测血清Treg-Th17细胞亚群偏移情况变化。
结果与sham组（1.01±0.04，1.00±0.03）比，OVX组的BMSCs中NEF的表达下调（0.23±0.01），miR-21上调（2.96±0.05）（P<0.05）。与OVX组（1.23±0.15，5.20±0.31）比，pIRSE2-NEF组BMSCs细胞中NEF明显上调（6.83±0.35）（P<0.05），而miR-21下调（0.29±0.11）（P<0.05）。NEF与miR-21具有直接结合碱基位点。OVX组小鼠外周血的IFN-γ（3.25±0.21）、IL-2（2.44±0.06）水平，Th17/Treg比率（3.18±0.65）与sham组（1.03±0.02、1.00±0.01、0.86±0.09）比上升（均P<0.05），而IL-4（0.45±0.02）、IL-13（0.43±0.07）、PD-1（0.24±0.03）及PD-1L（0.51±0.06）的水平与sham组（1.00±0.04、1.00±0.02、1.00±0.03、1.00±0.00）比降低（均P<0.05）；而与OVX比，pIRSE2-NEF组的IFN-γ（2.02±0.06）、IL-2水平（0.88±0.01）、Th17/Treg比率（1.43±0.22）降低，IL-4（0.87±0.03）、IL-13（0.84±0.07）、PD-1（0.79±0.06）及PD-1L（0.77±0.06）的水平升高（均P<0.05）；与pIRSE2-NEF组比，pIRSE2-NEF+PD-L1-IN-1组中的IFN-γ（2.89±0.06）、IL-2水平（2.07±0.07）、Th17/Treg比率（2.39±0.38）上升，IL-4（0.68±0.03）、IL-13（0.76±0.08）、PD-1（0.52±0.02）及PD-1L（0.83±0.04）的水平降低（均P<0.05）；且pIRSE2-NEF+mimic组与pIRSE2-NEF+PD-L1-IN-1组的调节效果一致。
结论lncRNA-NEF通过吸附miR-21改善绝经后骨质疏松小鼠免疫失衡和PD-1/PD-1L介导的Treg-Th17细胞平衡。
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