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目的
探索低温保存狗肾细胞(MDCK)对B型流感病毒分离和增殖的影响。
方法复苏冻存的P17代MDCK细胞,传至2~4代后,选择生长状态及形态良好的单层细胞,换新鲜细胞生长液,于4℃保存3 d、6 d、9 d后,在相同培养条件下同时接种流感样病例咽拭子标本。上毒24 h后每天观察细胞病变,采用实时荧光PCR相对定量法测定病毒的增殖率,血清学试验测定病毒血凝效价,同时以同一代次常规培养的MDCK细胞单层为对照。
结果(1)细胞病变:与对照相比较,4℃低温保存3、6 d的细胞细胞病变无差别,而保存9 d的细胞细胞病变快,维持时间短。(2)荧光定量:4℃低温保存3、6 d的细胞对流感病毒的增殖(25.86×105~30.25×106、26.31×105~30.54×106)与常规分离(24.82×105~29.86×106)相比无差别,其增值率在105~106倍之间。而9 d的细胞(19.72×104~28.34×105)则较对照要低,增值率在104~105倍之间。(3)HA效价:4℃保存3 d和6 d的细胞分离病毒血凝效价大于1︰16的毒株数与常规细胞(10.92± 0.79)比较,差异无统计学意义(P>0.05),而保存9 d的细胞分离病毒血凝效价大于1︰16的毒株数较正常细胞低并有统计学意义(P<0.01)。
结论4℃低温保存1周内MDCK细胞单层对B型流感病毒的分离和增值无影响。