复制缺陷性腺病毒联合氮烯咪胺对黑素瘤细胞凋亡的调控作用

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目的 观察荷载黑素瘤分化相关基因-7(mda-7)的复制缺陷性腺病毒Ad-mda-7联合氮烯咪胺(DTIC)对黑素瘤M14细胞的诱导凋亡作用.方法 将M14细胞分为4组进行干预,分别为PBS组、DTIC组、Ad-mda-7组、Ad-mda-7联合DTIC组.应用CCK-8法检测细胞抑制率;应用结晶紫法检测细胞毒性;应用Annexin Ⅴ法检测细胞凋亡率;应用Western blot法检测mda-7蛋白及bax、bcl-xL、Mcl-1、Caspase-9、Caspase-3凋亡相关蛋白表达.结果 CCK-8法显示10 MOI+10 mg/L的Ad-mda-7联合DTIC干预M14细胞48 h后抑制率为(73.56±2.58)%,与对应剂量的Ad-mda-7(32.30±2.38)%、DTIC(15.75±3.21)%比较,差异有统计学意义(P<0.05);结晶紫法结果表明Ad-mda-7联合DTIC较Ad-mda-7、DTIC对M14细胞有显著的细胞毒性效应;Annexin Ⅴ法显示10MOI+10 mg/L的Ad-mda-7联合DTIC干预M14细胞48 h后凋亡率为(71.47±3.57)%,与对应剂量的Ad-mda-7(40.11±3.61)%、DTIC(22.27±2.30)%比较,差异有统计学意义(P<0.05);Western blot结果表明Ad-mda-7联合DTIC作用的M14细胞能高效表达mda-7,同时bax的表达增加,Mcl-1、bcl-xL的表达降低,Caspase-9、Caspase-3被裂解活化.结论 荷载mda-7基因的复制缺陷性腺病毒Ad-mda-7联合化疗药物DTIC有明显的协同诱导黑素瘤细胞凋亡的作用。

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