【摘 要】
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目的构建HIV-1中和抗体全基因共表达真核质粒载体，观察其在293T细胞中的表达并检测其活性。方法合成HIV-1中和抗体2G12轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，与含人IgG轻、重链恒定区的载体分别连接，构建出完整的2G12轻链和重链的载体，通过PCR扩增与连接将2G12轻、重链全长构建到真核表达载体pVR中，同时将内部核糖体进入位点(Internal ribosome entry site
【机 构】
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100124 北京工业大学生命科学与生物工程学院药物研究所,100124 北京工业大学生命科学与生物工程学院药物研究所,100124 北京工业大学生命科学与生物工程学院药物研究所,100124 北京工
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目的构建HIV-1中和抗体全基因共表达真核质粒载体，观察其在293T细胞中的表达并检测其活性。
方法合成HIV-1中和抗体2G12轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，与含人IgG轻、重链恒定区的载体分别连接，构建出完整的2G12轻链和重链的载体，通过PCR扩增与连接将2G12轻、重链全长构建到真核表达载体pVR中，同时将内部核糖体进入位点(Internal ribosome entry site, IRES)插入到此载体中构建双基因表达系统，重组质粒转染293T细胞进行瞬时表达，ELISA检测抗体表达效果，通过结合实验及中和实验检测细胞上清的结合活性和中和活性。
结果获得可表达人IgG的重组双基因真核表达载体，转染后上清的抗体表达量为6.43 μg/ml，并且抗体保留了原来的结合活性和中和活性。
结论所构建的载体可表达具有较好的结合活性和中和活性的抗体，本研究为真核表达载体表达人HIV中和抗体全基因方面提供了可选择的平台。
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