目的构建D-半乳糖诱导小鼠皮肤成纤维细胞(MSF)衰老模型。方法取5～7 d昆明乳鼠背部皮肤,采用Ⅰ型胶原酶消化法分离获得MSF,通过形态学观察及Vimentin免疫组织化学法鉴定MSF细胞。分别用不同浓度D-半乳糖诱导MSF细胞0、24、48 h,采用β-半乳糖苷酶衰老染色、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测衰老相关基因p53、细胞免疫荧光法分析Sirt1基因表达水平,并分析细胞衰老情况。结果光学显微镜下细胞呈多突的梭形或星形的扁平细胞,Vimentin蛋白免疫组织化学分析呈阳性。β-半乳糖苷酶衰老染色实验结果显示,不同浓度D-半乳糖诱导后染色阳性细胞数量较对照组显著增多,差异有统计学意义(P<0.01)。在D-半乳糖(20 g/L)诱导24、48 h后,与对照组比较,衰老MSF p53基因表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.01);细胞免疫荧光结果显示,D-半乳糖诱导48 h后Sirt1蛋白表达水平明显降低。结论通过Ⅰ型胶原酶消化法及D-半乳糖诱导法成功建立了衰老模型。