氧化应激下黑素细胞自噬相关基因差异表达分析

来源 :中华皮肤科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:fuwanyi
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目的

探讨过氧化氢(H2O2)对黑素细胞自噬的影响及可能的调节机制。

方法

取对数生长期健康人黑素细胞,分为空白对照组(不予任何处理)、阳性对照组(100 nmol/L西罗莫司处理)和实验组(体积分数为10-7 ~ 10-3的H2O2处理),处理4 h后,使用CCK8法、流式细胞仪分别检测各组黑素细胞活性及凋亡率。吖啶橙染色检测自噬小泡,透射电镜下观察自噬小体,Western印迹检测自噬特异性蛋白Beclin 1、微管相关蛋白轻链3B(LC3B)。最后采用包含84个自噬相关基因的RT2 Profiler PCR Array筛选自噬相关的差异表达基因。

结果

黑素细胞分别经10-3、5 × 10-4、10-4、5 × 10-5、10-5、5 × 10-6、10-6 H2O2处理后,细胞增殖活性及凋亡率与空白对照组相比差异均有统计学意义(F值分别为286.95、301.23,均P<0.05),且随H2O2体积分数升高,增殖活性降低,凋亡率升高。除5 × 10-6 H2O2组分别与10-5、10-6 H2O2组间相比细胞凋亡率差异无统计学意义外,上述各H2O2组间两两比较,黑素细胞增殖活性及凋亡率差异均有统计学意义(P < 0.05)。吖啶橙染色及电镜观察发现,10-5 H2O2、10-6 H2O2和西罗莫司处理的黑素细胞中有自噬小体形成。Western印迹显示,10-5 H2O2、10-6 H2O2和西罗莫司组黑素细胞Beclin 1表达量和LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比率均较空白对照组显著升高(P<0.05)。RT2 Profiler PCR Array结果显示,与空白对照组相比,10-5 H2O2组、10-6 H2O2组和西罗莫司组中ATG12、ATG3、ULK1、PIK3CG、PTEN、PIK3C3表达均显著上调,EIF2AK3表达显著下调;10-5 H2O2组和西罗莫司组mTOR表达显著下调,ULK2表达显著上调;10-6 H2O2组mTOR表达未发生明显改变, AMPK、JNK1表达显著上调。

结论

体积分数为10-5和10-6的H2O2均能有效诱导黑素细胞自噬,可能与影响相关信号分子表达相关。

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