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【摘 要】 目的：探讨五节芒对阿霉素致小鼠肾损伤的保护作用。方法：建立阿霉素诱导小鼠的肾病模型，连续灌服五节芒水煎液4周后，检测小鼠血清中的尿素氮（BUN）和肌酐（Cr）含量;计算肾脏指数;ELISA 法检测肾组织中炎症因子白介素-8（IL-8）的含量。结果：五节芒治疗后小鼠血清中的BUN和Cr的含量、肾脏指数及肾组织中炎症因子IL-8含量均较模型组小鼠明显减少（P<0.05）。结论：五节芒对阿霉素所致小鼠肾损伤具有一定的保护作用。
【关键词】 五节芒;阿霉素;肾损伤
【中图分类号】R285.5 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2021）13-0029-04
Abstract：Objective To investigate the protective effects of Miscanthus floridulus on adriamycin-induced kidney injury in mice. Methods Adriamycin-induced kidney injury model mice were established by a single intravenous injection of Adriamycin. They were given corresponding medicine or saline for 4 weeks. The effects of Miscanthus floridulus on kidney index，urea nitrogen （BUN） and creatinine （Cr） in the serum of mice were observed. ELISA was used to measure the expressions of IL-8 in renal tissue.Results After Miscanthus floridulus treatment，kidney index，the content of BUN and Cr，the expression of IL-8 were decreased markedly compared with model group （P<0.05）. Conclusion Miscanthus floridulus might protect mice kidney from injury induced by ADR.
Keywords：Miscanthus floridulus; Adriamycin; Kidney Injury
急性腎损伤是临床最常见的急危重症之一，其发病率约为30%，并且与患者的预后不良有关，全球每年约有400万例死于急性肾损伤，且发病率和死亡率不断攀升，造成严重的健康和经济问题[1]。目前，临床上对于急性肾损伤提倡早发现、早治疗，国内外对其干预研究还处于探索阶段，还没有治疗效果良好的药物[2]。急性肾损伤所涉及的发病机制包括炎症、氧化应激和凋亡等，其中炎症反应被认为是细胞病理损伤的关键致病因素，其导致的病理损伤贯穿于多种肾脏病发生、发展的过程中。
五节芒为禾本科多年生草本植物五节芒Miscanthus floridulus （Lab.） Warb. ex Schum. et Laut.的茎，其性平，味甘、淡，具有清热通淋、祛风除湿的功效[3]。临床上常用于治疗热淋、白浊、白带、急性肾孟肾炎、泌尿道结石等[4]。五节芒主要含有木脂素类、甾醇类、苷类等成分[5]，近年来有研究发现，五节芒的苷类成分可明显抑制脂多糖LPS引起的NF-κB激活，具有一定的抗炎活性[4]，但目前有关它的药理作用研究未见系统的研究和报导。本研究采用阿霉素致BLAB/C小鼠肾损伤，建立急性肾损伤小鼠模型，研究五节芒水煎液对小鼠肾组织的保护作用，为临床应用提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 试验动物 BLAB/C 小鼠，清洁级，雄性，18～21 g，50只，上海斯莱克实验动物有限责任公司，合格证号 SCXK（沪）：2017-0005。
1.2 试验药品 五节芒茎，采自闽侯县鸿尾乡里头村，由池志珍等鉴定为禾本科芒属植物五节芒Miscanthus floridulus （Lab.） Warb.ex Schum.et Laut.。盐酸贝那普利片，北京诺华制药有限公司，批号：X2893;阿霉素，瀚晖制药有限公司，批号：19019833。
1.3 五节芒水煎液的制备 取干燥的五节芒100 g切成小段，置于容器内，加12倍量的水浸泡30 min，加热至沸腾（需时时搅拌）后保持60 min，滤出药液，再加12倍量水加热至沸腾（需时时搅拌）后保持30 min，滤出药液，合并两次的药液，蒸发浓缩成0.5 g·mL-1生药量的水煎剂。
1.4 实验方法
1.4.1 小鼠肾损伤模型的建立、分组与给药 雄性BLAB/C小鼠50只，按体重随机分为5组，即：正常对照组、模型组、五节芒低、高剂量组、阳性对照组，每组10只。除正常对照组外，其它4组小鼠均尾静脉一次性注射11 mg·kg-1体重的阿霉素溶液[5]。从造模第2天开始各组分别按剂量灌胃给药，五节芒高剂量组给予10.0 g·kg-1五节芒水煎剂，五节芒低剂量组给予5.0 g·kg-1五节芒水煎剂，阳性对照组给予2 mg·kg-1贝那普利混悬液，给药体积按20 mL· Kg-1体重灌胃，正常对照组与模型组给予等体积的蒸馏水，每天1次，连续灌胃给药4周。
1.4.2 小鼠血清中尿素氮和肌酐的含量测定 末次给药24 h后，摘眼球取血，离心（3000 rpm，10 min），取血清，采用全自动生化分析仪分别检测血清中尿素氮（BUN）和肌酐（Cr）的含量。 1.4.3 小鼠肾脏指数 采血后，处死小鼠，打开小鼠腹腔，摘取右侧肾脏称量，并计算肾脏指数。计算公式如下：小鼠肾脏指数=小鼠肾脏的质量/小鼠体质量× 100% 。
1.4.4 小鼠肾组织中炎症因子IL-8的含量测定 取右侧肾脏，称重，加PBS液，用电动匀浆器匀浆，离心取上清液，按照ELISA试剂盒说明书操作，用酶标仪在450 nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算肾组织匀浆上清液中小鼠IL-8含量。
1.4.5 肾组织病理学观察 采血后，处死小鼠，打开小鼠腹腔，摘取左肾，福尔马林固定左肾组织，经石蜡包埋、切片、HE染色后，光镜下觀察肾组织病理变化。
1.4.6 统计学方法 采用 SPSS14.0软件进行数据分析，实验数据以均数加减标准差（x±s）表示，P<0.05为差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 五节芒水煎液对肾损伤小鼠体重的影响 用阿霉素造模后，模型组小鼠体重与正常对照组比较，明显减轻（P<0.05），给药组在给药1周后，给药组体重较模型组明显增加（P<0.05），随着时间延长，给药组与模型组的体重差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。
2.2 五节芒水煎液对肾损伤小鼠血清中BUN和Cr含量的检测 与正常对照组相比，模型组小鼠血清中BUN和Cr的含量明显升高（P<0.01）;与模型组相比，五节芒低、高剂量组及阳性对照组小鼠血清中的 BUN和 Cr的含量均明显降低（P<0.05或0.01）。见表2。
2.3 五节芒水煎液对小鼠肾脏指数的影响 与正常对照组相比，模型组小鼠肾脏指数明显增大（P<0.01）;与模型组相比，五节芒低、高剂量组及阳性对照组小鼠肾脏指数均明显降低（P<0.05）。见表3。
2.4 五节芒水煎液对肾组织中炎症因子IL-8含量的影响 与正常对照组比，模型组肾组织中 IL-8的含量明显增加（P<0.01）;与模型组相比，五节芒低、高剂量组及阳性对照组小鼠肾组织中的炎症因子IL-8含量均明显减少（P<0.05或0.01）。见表4。
2.5 肾组织病理学观察 高倍镜下观察发现，正常对照组小鼠肾组织形态学正常，造模组小鼠肾小体毛细血管球体积增大，肾小球内细胞数量上升，包含大量红细胞，肾小囊层结构被破坏，毛细血管球被挤压并伴炎症细胞浸润，肾小管管腔可见炎症细胞浸（如图红色箭头）润。五节芒低、高剂量组及阳性对照组小鼠肾组织上述损伤程度均较模型组小。如图1所示。
3 讨论
阿霉素是一种抗肿瘤的抗生素，它对RNA和DNA的合成具有抑制作用，其诱导的急性肾损伤是一个成熟的和高重复性的肾病模型[6-7]。本实验采用一次性尾静脉注射阿霉素11 mg·kg-1致BLAB/C小鼠肾损伤模型，肾组织病理学观察结果显示造模组小鼠肾小体毛细血管球体积增大，肾小球内细胞数量上升，包含大量红细胞，肾小囊层结构被破坏，毛细血管球被挤压并伴炎症细胞浸润，肾小管管腔可见炎症细胞浸润，符合急性肾损伤表现，与文献[6]研究相一致。
本研究利用阿霉素诱导小鼠肾损伤模型探讨五节芒水煎液对小鼠肾损伤的保护作用，研究结果显示，与正常对照组相比，模型组小鼠肾脏指数及血清BUN、Cr 水平升高，同时模型组肾病粒结构严重损伤，肾小管上皮细胞空泡及颗粒变性，肾小囊层结构被破坏，毛细血管球被挤压并伴炎症细胞浸润，肾小管管腔可见炎症细胞浸，符合急性肾损伤炎症反应等表现[6]。与模型组相比，五节芒水煎液低、高剂量组血清中BUN、Cr水平明显下降，肾组织病理损伤变化部分得到恢复，这些结果提示五节芒水煎液能够改善肾功能和肾组织的损伤。同时结果发现与模型组相比，五节芒水煎液低、高剂量组肾组织中的炎症因子IL-8含量明显减少，提示五节芒水煎液可改善炎症反应，这与文献[5]中报道的一致。综上所述，五节芒水煎液对阿霉素诱导的小鼠肾损伤具有保护作用，为其在治疗急性肾损伤方面提供了理论依据，但其作用机制仍需进一步研究。
参考文献
[1]SRISAWAT N，SILEANU F E，MURUGAN R，et al.Variation in risk and mortality of acute kidney injury in critically ill patients： a multicenter study [J]. Am J Nephrol，2015（41）：81-88.
[2]SUTHERLAND S M，KWIATKOWSKI D M. Acute kidney injury in children [J]. Adv Chronic Kidney Dis，2017，24（6）： 380-387.
[3]泉州市泉港区中医药学会.泉港本草（第五辑）[M].福州：海峡出版发行集团/福建科学技术出版社，2017.
[4]福建省中医药研究所编.福建药物志（第二册）[M].福州：福建科学技术出版社，1982：412-413.
[5]熊礼燕.五节芒化学成分及其生物活性的研究[D].上海：第二军医大学，2011：40.
[6]舒适，张瑞义，徐中菊，等. 真武汤对阿霉素所致小鼠肾损伤保护作用的实验研究 [J].中国中医药科技，2016，23（5）：526-529.
[7]张悦，魏民，王谦，等.阿霉素复制大鼠微小病变肾病模型的研究[J].北京中医药大学学报，2002，25（2）：16-18.
（收稿日期：2020-12-02 编辑：刘斌）
【关键词】 五节芒;阿霉素;肾损伤
【中图分类号】R285.5 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2021）13-0029-04
Abstract：Objective To investigate the protective effects of Miscanthus floridulus on adriamycin-induced kidney injury in mice. Methods Adriamycin-induced kidney injury model mice were established by a single intravenous injection of Adriamycin. They were given corresponding medicine or saline for 4 weeks. The effects of Miscanthus floridulus on kidney index，urea nitrogen （BUN） and creatinine （Cr） in the serum of mice were observed. ELISA was used to measure the expressions of IL-8 in renal tissue.Results After Miscanthus floridulus treatment，kidney index，the content of BUN and Cr，the expression of IL-8 were decreased markedly compared with model group （P<0.05）. Conclusion Miscanthus floridulus might protect mice kidney from injury induced by ADR.
Keywords：Miscanthus floridulus; Adriamycin; Kidney Injury
急性腎损伤是临床最常见的急危重症之一，其发病率约为30%，并且与患者的预后不良有关，全球每年约有400万例死于急性肾损伤，且发病率和死亡率不断攀升，造成严重的健康和经济问题[1]。目前，临床上对于急性肾损伤提倡早发现、早治疗，国内外对其干预研究还处于探索阶段，还没有治疗效果良好的药物[2]。急性肾损伤所涉及的发病机制包括炎症、氧化应激和凋亡等，其中炎症反应被认为是细胞病理损伤的关键致病因素，其导致的病理损伤贯穿于多种肾脏病发生、发展的过程中。
五节芒为禾本科多年生草本植物五节芒Miscanthus floridulus （Lab.） Warb. ex Schum. et Laut.的茎，其性平，味甘、淡，具有清热通淋、祛风除湿的功效[3]。临床上常用于治疗热淋、白浊、白带、急性肾孟肾炎、泌尿道结石等[4]。五节芒主要含有木脂素类、甾醇类、苷类等成分[5]，近年来有研究发现，五节芒的苷类成分可明显抑制脂多糖LPS引起的NF-κB激活，具有一定的抗炎活性[4]，但目前有关它的药理作用研究未见系统的研究和报导。本研究采用阿霉素致BLAB/C小鼠肾损伤，建立急性肾损伤小鼠模型，研究五节芒水煎液对小鼠肾组织的保护作用，为临床应用提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 试验动物 BLAB/C 小鼠，清洁级，雄性，18～21 g，50只，上海斯莱克实验动物有限责任公司，合格证号 SCXK（沪）：2017-0005。
1.2 试验药品 五节芒茎，采自闽侯县鸿尾乡里头村，由池志珍等鉴定为禾本科芒属植物五节芒Miscanthus floridulus （Lab.） Warb.ex Schum.et Laut.。盐酸贝那普利片，北京诺华制药有限公司，批号：X2893;阿霉素，瀚晖制药有限公司，批号：19019833。
1.3 五节芒水煎液的制备 取干燥的五节芒100 g切成小段，置于容器内，加12倍量的水浸泡30 min，加热至沸腾（需时时搅拌）后保持60 min，滤出药液，再加12倍量水加热至沸腾（需时时搅拌）后保持30 min，滤出药液，合并两次的药液，蒸发浓缩成0.5 g·mL-1生药量的水煎剂。
1.4 实验方法
1.4.1 小鼠肾损伤模型的建立、分组与给药 雄性BLAB/C小鼠50只，按体重随机分为5组，即：正常对照组、模型组、五节芒低、高剂量组、阳性对照组，每组10只。除正常对照组外，其它4组小鼠均尾静脉一次性注射11 mg·kg-1体重的阿霉素溶液[5]。从造模第2天开始各组分别按剂量灌胃给药，五节芒高剂量组给予10.0 g·kg-1五节芒水煎剂，五节芒低剂量组给予5.0 g·kg-1五节芒水煎剂，阳性对照组给予2 mg·kg-1贝那普利混悬液，给药体积按20 mL· Kg-1体重灌胃，正常对照组与模型组给予等体积的蒸馏水，每天1次，连续灌胃给药4周。
1.4.2 小鼠血清中尿素氮和肌酐的含量测定 末次给药24 h后，摘眼球取血，离心（3000 rpm，10 min），取血清，采用全自动生化分析仪分别检测血清中尿素氮（BUN）和肌酐（Cr）的含量。 1.4.3 小鼠肾脏指数 采血后，处死小鼠，打开小鼠腹腔，摘取右侧肾脏称量，并计算肾脏指数。计算公式如下：小鼠肾脏指数=小鼠肾脏的质量/小鼠体质量× 100% 。
1.4.4 小鼠肾组织中炎症因子IL-8的含量测定 取右侧肾脏，称重，加PBS液，用电动匀浆器匀浆，离心取上清液，按照ELISA试剂盒说明书操作，用酶标仪在450 nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算肾组织匀浆上清液中小鼠IL-8含量。
1.4.5 肾组织病理学观察 采血后，处死小鼠，打开小鼠腹腔，摘取左肾，福尔马林固定左肾组织，经石蜡包埋、切片、HE染色后，光镜下觀察肾组织病理变化。
1.4.6 统计学方法 采用 SPSS14.0软件进行数据分析，实验数据以均数加减标准差（x±s）表示，P<0.05为差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 五节芒水煎液对肾损伤小鼠体重的影响 用阿霉素造模后，模型组小鼠体重与正常对照组比较，明显减轻（P<0.05），给药组在给药1周后，给药组体重较模型组明显增加（P<0.05），随着时间延长，给药组与模型组的体重差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。
2.2 五节芒水煎液对肾损伤小鼠血清中BUN和Cr含量的检测 与正常对照组相比，模型组小鼠血清中BUN和Cr的含量明显升高（P<0.01）;与模型组相比，五节芒低、高剂量组及阳性对照组小鼠血清中的 BUN和 Cr的含量均明显降低（P<0.05或0.01）。见表2。
2.3 五节芒水煎液对小鼠肾脏指数的影响 与正常对照组相比，模型组小鼠肾脏指数明显增大（P<0.01）;与模型组相比，五节芒低、高剂量组及阳性对照组小鼠肾脏指数均明显降低（P<0.05）。见表3。
2.4 五节芒水煎液对肾组织中炎症因子IL-8含量的影响 与正常对照组比，模型组肾组织中 IL-8的含量明显增加（P<0.01）;与模型组相比，五节芒低、高剂量组及阳性对照组小鼠肾组织中的炎症因子IL-8含量均明显减少（P<0.05或0.01）。见表4。
2.5 肾组织病理学观察 高倍镜下观察发现，正常对照组小鼠肾组织形态学正常，造模组小鼠肾小体毛细血管球体积增大，肾小球内细胞数量上升，包含大量红细胞，肾小囊层结构被破坏，毛细血管球被挤压并伴炎症细胞浸润，肾小管管腔可见炎症细胞浸（如图红色箭头）润。五节芒低、高剂量组及阳性对照组小鼠肾组织上述损伤程度均较模型组小。如图1所示。
3 讨论
阿霉素是一种抗肿瘤的抗生素，它对RNA和DNA的合成具有抑制作用，其诱导的急性肾损伤是一个成熟的和高重复性的肾病模型[6-7]。本实验采用一次性尾静脉注射阿霉素11 mg·kg-1致BLAB/C小鼠肾损伤模型，肾组织病理学观察结果显示造模组小鼠肾小体毛细血管球体积增大，肾小球内细胞数量上升，包含大量红细胞，肾小囊层结构被破坏，毛细血管球被挤压并伴炎症细胞浸润，肾小管管腔可见炎症细胞浸润，符合急性肾损伤表现，与文献[6]研究相一致。
本研究利用阿霉素诱导小鼠肾损伤模型探讨五节芒水煎液对小鼠肾损伤的保护作用，研究结果显示，与正常对照组相比，模型组小鼠肾脏指数及血清BUN、Cr 水平升高，同时模型组肾病粒结构严重损伤，肾小管上皮细胞空泡及颗粒变性，肾小囊层结构被破坏，毛细血管球被挤压并伴炎症细胞浸润，肾小管管腔可见炎症细胞浸，符合急性肾损伤炎症反应等表现[6]。与模型组相比，五节芒水煎液低、高剂量组血清中BUN、Cr水平明显下降，肾组织病理损伤变化部分得到恢复，这些结果提示五节芒水煎液能够改善肾功能和肾组织的损伤。同时结果发现与模型组相比，五节芒水煎液低、高剂量组肾组织中的炎症因子IL-8含量明显减少，提示五节芒水煎液可改善炎症反应，这与文献[5]中报道的一致。综上所述，五节芒水煎液对阿霉素诱导的小鼠肾损伤具有保护作用，为其在治疗急性肾损伤方面提供了理论依据，但其作用机制仍需进一步研究。
参考文献
[1]SRISAWAT N，SILEANU F E，MURUGAN R，et al.Variation in risk and mortality of acute kidney injury in critically ill patients： a multicenter study [J]. Am J Nephrol，2015（41）：81-88.
[2]SUTHERLAND S M，KWIATKOWSKI D M. Acute kidney injury in children [J]. Adv Chronic Kidney Dis，2017，24（6）： 380-387.
[3]泉州市泉港区中医药学会.泉港本草（第五辑）[M].福州：海峡出版发行集团/福建科学技术出版社，2017.
[4]福建省中医药研究所编.福建药物志（第二册）[M].福州：福建科学技术出版社，1982：412-413.
[5]熊礼燕.五节芒化学成分及其生物活性的研究[D].上海：第二军医大学，2011：40.
[6]舒适，张瑞义，徐中菊，等. 真武汤对阿霉素所致小鼠肾损伤保护作用的实验研究 [J].中国中医药科技，2016，23（5）：526-529.
[7]张悦，魏民，王谦，等.阿霉素复制大鼠微小病变肾病模型的研究[J].北京中医药大学学报，2002，25（2）：16-18.
（收稿日期：2020-12-02 编辑：刘斌）