【摘 要】
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目的:为便于人干扰素γ功能研究,制备6His修饰的人干扰素γ。方法:采用一步反向PCR扩增编码人干扰素γ的cDNA序列,克隆到质粒pUC19,测序鉴定正确后构建于pQE80L表达质粒,BamH
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目的:为便于人干扰素γ功能研究,制备6His修饰的人干扰素γ。方法:采用一步反向PCR扩增编码人干扰素γ的cDNA序列,克隆到质粒pUC19,测序鉴定正确后构建于pQE80L表达质粒,BamHI和HindIII双酶切,行1.2%琼脂糖凝胶电泳鉴定;SDS-PAGE和Western blot检测表达的目的蛋白,Ni~2+-NTA柱纯化蛋白,酶联免疫吸附测定纯化的目的蛋白。结果:一步反向PCR扩增得到编码人干扰素γcDNA片段,测序结果正确,SDS-PAGE和Western b1ot分析显示His修饰的人干扰素γ在大肠杆菌中获得了高效表达,SDS-PAGE证实目的蛋白具有较高纯度,酶联免疫吸附测定出目的蛋白。结论:本法成功制备了6His肽修饰的人干扰素γ。
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