【摘 要】
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目的：探索并确定甘精胰岛素的最佳酶解条件,建立酶解更完全、特异性更强的甘精胰岛素肽图分析方法.方法：采用0.4mol/LTris-HCl（pH9.0）溶液作为酶解缓冲液,V8蛋白酶与甘精胰岛素之
【机 构】
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中国食品药品检定研究院,中国药科大学生命科学与技术学院
【基金项目】
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中国食品药品检定研究院重大新药创制专项生物类似药质量相似性评价体系建设研究(2015ZX09501008-001)
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目的：探索并确定甘精胰岛素的最佳酶解条件,建立酶解更完全、特异性更强的甘精胰岛素肽图分析方法.方法：采用0.4mol/LTris-HCl（pH9.0）溶液作为酶解缓冲液,V8蛋白酶与甘精胰岛素之比为1U∶10μg,于37℃反应1h后加入磷酸终止反应,采用RP-HPLC分离目标肽段,采用液相色谱-质谱联用（LC-MS）方法鉴定酶解产生的肽段.结果：甘精胰岛素基本完全酶解,未消化的主成分较《欧洲药典》9.5版（EP9.5）方法大幅减少,时间缩短了1/2,酶解的完全性与有效性大幅提高.产生的4个目标肽段可通过R
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