【摘 要】
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为探索人白细胞介素-6(IL-6)在原核细胞中高效表达的途径,选用BL21(DE3)/PET-28作为表达系统,以聚合酶链反应(PCR)技术扩增了hIL-6的互补DNA(cDNA)的编码区,引入了EcoRI和Hin
【机 构】
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中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所
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为探索人白细胞介素-6(IL-6)在原核细胞中高效表达的途径,选用BL21(DE3)/PET-28作为表达系统,以聚合酶链反应(PCR)技术扩增了hIL-6的互补DNA(cDNA)的编码区,引入了EcoRI和Hind Ⅲ位点.用限制性内切酶EcoRI和Hind Ⅲ酶切后,克隆于PET-28载体的相应位点,转化DH5α.选出阳性克隆,经DNA序列分析,表明其编码区内无非特异突变.将重组质粒转入DH5α,筛选阳性克隆,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达.全细菌裂解液进行十二烷基黄酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),结合固化蛋白质的免疫学测定(Western-blot)杂交进行分析.结果表明:Western-blot杂交发现有与抗IL-6特异结合的蛋白带,以4h的产量最多,激光扫描显示IL-6的吸收峰占总吸收面积的37%(4h诱导).分子量约为27kD.实验显示,人IL-6在原核细胞中实现了高效表达,表达产物具有IL-6的免疫活性.
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