目的建立高效、可靠、经济的人脐静脉内皮细胞原代培养方法,为体外研究血管内皮细胞提供实验手段。方法取健康剖腹产新生婴儿脐带,立即用0.1%Ⅰ型胶原酶室温消化,得血管内皮细胞,置于5%CO2、37℃培养箱进行原代培养,培养基采用M199培养基,含有10%胎牛血清、2 mmol/L谷氨酰胺、50μg/ml肝素钠、10 u/mlbFGF(贝复济,牛碱性成纤维细胞生长因子,basic fibro blast growth factor)、100 u/ml青霉素、50 u/ml庆大霉素。在倒置显微镜下观察原代及传代细胞的形态特点,同时用免疫组织化学的方法对所得细胞进行鉴定。结果采用0.1%Ⅰ型胶原酶灌注法及改良培养基获得了相当数量的人脐静脉内皮细胞。光镜下观察见大量3~4个成团的内皮细胞。细胞接种后4 h开始贴壁生长,5 d左右可融合成片,原代细胞呈小三角形、圆形或梭形,细胞分布不均匀,成簇生长,互不重叠;传代细胞多为扁平多角形铺路石状镶嵌排列,3 d左右可融合成片。免疫组化可见内皮细胞胞浆中人第Ⅷ因子相关抗原呈阳性反应。结论Ⅰ型胶原酶灌注法是获得脐静脉内皮细胞的一种可取方法,成功率高,可靠性大。改良培养基能很好地促进内皮细胞体外培养及传代扩增,可成功构建体外研究血管内皮细胞的模型。