【摘 要】
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目的采用非亲和纯化方法从人血清中制备获得高纯度转铁蛋白(TRF),并用此为免疫抗原免疫新西兰大白兔,验证TRF蛋白的免疫原性。方法首先采用两步硫酸铵沉淀法从血清中粗纯TRF
【基金项目】
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宁波市生命健康重大项目（2017C110014）
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目的采用非亲和纯化方法从人血清中制备获得高纯度转铁蛋白(TRF),并用此为免疫抗原免疫新西兰大白兔,验证TRF蛋白的免疫原性。方法首先采用两步硫酸铵沉淀法从血清中粗纯TRF蛋白,再用两步阴离子交换层析柱进行纯化,最终得到TRF。结果 TRF蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)纯度与外购纯品相当,且高效液相色谱(HPLC)纯度达到96.8%,纯化回收率为78.6%。对于同一批TRF样品,TRF检测试剂盒(免疫法)测得的活性浓度与紫外分光光度计法测得的蛋白浓度比值(Rc)约为0.95,说明制备的TRF与免疫检测试剂盒中的TRF抗体具有良好的抗原反应性。最后用纯化样品免疫新西兰大白兔,经过4次免疫后的抗血清效价滴度达到1∶128 000,说明制备的TRF具有良好的免疫原性。结论制备的高纯度TRF具有良好的抗原反应性及免疫原性,可用于动物免疫以制备抗TRF抗体,为配制TRF检测试剂(免疫法)提供良好的原料基础。
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