【摘 要】
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目的：构建14-3-3σ逆转录病毒载体,并建立高表达14-3-3σ的HaCat细胞系。方法：以人基因组为模板,通过PCR扩增出14-3-3σ基因的编码序列,定向插入到pLEGFP-N1质粒中,并在STBL3内
【机 构】
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南方医科大学公共卫生与热带医学学院放射医学系
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目的：构建14-3-3σ逆转录病毒载体,并建立高表达14-3-3σ的HaCat细胞系。方法：以人基因组为模板,通过PCR扩增出14-3-3σ基因的编码序列,定向插入到pLEGFP-N1质粒中,并在STBL3内进行扩增,刷选阳性克隆,酶切和测序验证后,转染293FT细胞进行病毒包装、扩增、纯化、获取逆转录病毒载体,将逆转录病毒载体感染HaCat细胞后Western、实时荧光定量PCR法检测14-3-3σ的表达情况。结果：连接重组后经酶切和测序筛选出pLEGFP-N1-14-3-3σ;稳定转染的HaCat细胞
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