【摘 要】
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目的量少、片段长的目的基因受纯化回收效率低的影响而难于克隆,本实验的目的是探索快速高效克隆量少,片段长DNA的实验方法。方法以lnc RNA AL110200 5’RACE大片段PCR产物为
【机 构】
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北京协和医学院中国医学科学院国家心血管病中心阜外医院心血管疾病国家重点实验室; 北京大学医院内科;
【基金项目】
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中央高校基本科研业务费专项资金资助(3332015173);国家自然科学基金(30940029);留学人员科技活动项目择优资助(2015-LH01)
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目的量少、片段长的目的基因受纯化回收效率低的影响而难于克隆,本实验的目的是探索快速高效克隆量少,片段长DNA的实验方法。方法以lnc RNA AL110200 5’RACE大片段PCR产物为目的基因,应用高纯度、高分辨率的低熔点琼脂糖,分离得到含5.0 kb和2.0 kb的凝胶,直接用于连接和转化反应,通过克隆PCR和Sanger测序法鉴定克隆的正确性。结果经测序验证了5.0 kb和2.0 kb重组克隆的正确性,说明应用高纯度的低熔点琼脂糖凝胶可以快速克隆长达5.0kb基因片段。结论该方法是一种省时、高效、易行的长片段基因克隆方法。
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