【摘 要】
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目的 克隆人类DCC基因并构建其真核表达载体plRES2-AcGFP1/DCC,将人DCC基因转染人乳腺癌细胞MCF-7中稳定表达,检测转染后细胞生物学特性的变化.方法 构建DCC基因表达载体plRE
【基金项目】
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河南省2010年科技发展计划资助项目;
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目的 克隆人类DCC基因并构建其真核表达载体plRES2-AcGFP1/DCC,将人DCC基因转染人乳腺癌细胞MCF-7中稳定表达,检测转染后细胞生物学特性的变化.方法 构建DCC基因表达载体plRES2-AcGFP1/DCC,用脂质体法将DCC基因的真核质粒表达载体pIRES2-AcGFP1/DCC导人人乳腺癌细胞MCF7中,细胞计数、生长曲线、细胞黏附分析、软琼脂实验检测转染后细胞的生物学特性变化.结果 将逆转录-聚合酶链反应( RT-PCR)扩增后的产物克隆到真核表达载体pIRES2-AcGFP1/DCC上,经PCR扩增筛选鉴定和测序鉴定证实为所需序列,转染乳腺癌MCF-7细胞后,DCC基因的表达明显增强.细胞计数和细胞生长曲线结果表明,转染后的MCF-7/DCC细胞生长速度明显地低于亲代的MCF-7和MCF-7/vect细胞(P＜0.05).细胞黏附分析显示,MCF-7/DCC细胞的黏附率较其他两组明显降低(P＜0.05).MCF-7/DCC与MCF7细胞的克隆形成率分别为34％、68％,MCF-7/DCC细胞的克隆形成率低于亲本细胞(P＜0.05).结论 DCC基因可有效抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖、黏附能力.
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