目的研究美罗培南耐药铜绿假单胞菌的多药外排泵机制。方法采用琼脂稀释法测定美罗培南对141株铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度(MIC),同时观察加入泵抑制剂MC207110后的美罗培南对141株铜绿假单胞菌MIC变化,检测多药外排泵机制。实时定量PCR检测外排泵mRNA水平的表达。PCR扩增外排泵编码基因及调控基因并测序分析。结果外排泵表型试验显示美罗培南对69.1%(65/94)菌株的MIC降低至原来的1/4～1/512。20株美罗培南耐药铜绿假单胞菌中有4种外排泵基因mRNA表达水平有增高。其中以MexEF-OprN为最多,共有10株。其次为MexCD-oprJ,有5株。MexAB-OprM有4株,MexXY-OprM有3株。其中有2株细菌的MexA和MexC基因mRNA表达水平同时增高。20株美罗培南耐药铜绿假单胞菌的4种外排泵调控基因测序结果显示MexAB-OprM过度表达的菌株中有3株系mexR突变,1株系nalC突变所致,未发现nalD突变。5株MexCD-OprJ过度表达的菌株均发生了nfxB突变,10株MexEF-OprN高表达株均有mexT突变,3株MexXY-OprM高表达株均有mexZ基因突变。20株菌株外排泵编码基因(MexB、MexD、MexF、MexY)均未发生突变。结论外排泵机制可能是造成铜绿假单胞菌对美罗培南耐药的主要原因之一。外排泵系统的过度表达主要是由于其相应的调节基因突变所致。