【摘 要】
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家蚕微孢子虫孢子壁坚厚不易破碎,并对许多化学物质有很强的抵抗性,使用常规的核酸和蛋白抽提方法效果不够理想.研究建立玻璃珠破碎法快速制备家蚕微孢子虫基因组DNA和总蛋白
【机 构】
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浙江大学蚕蜂研究所,浙江出入境检验检疫局技术中心
【基金项目】
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现代农业产业技术体系专项项目;浙江省科技厅重大项目;国家质量监督检验检疫总局科研项目
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家蚕微孢子虫孢子壁坚厚不易破碎,并对许多化学物质有很强的抵抗性,使用常规的核酸和蛋白抽提方法效果不够理想.研究建立玻璃珠破碎法快速制备家蚕微孢子虫基因组DNA和总蛋白的方法,采用琼脂糖凝胶电泳和SDS-PAGE分析所得DNA的完整性和所得总蛋白的差异性,并对提取蛋白进行双向电泳试验.结果表明:使用玻璃珠破碎法对微孢子虫孢子壁的破碎率可达到90％以上,基因组DNA得率约为7.65 fg/粒,总蛋白得率约为788.3fg/粒,均显著高于常用的发芽法和液氮冻融研磨法的得率.双向电泳结果显示玻璃珠破碎法能有效提取家蚕微孢子虫总蛋白,经考马斯亮蓝染色可检测到约350个蛋白点,蛋白信息丰富,可进一步用于质谱分析.
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