【摘 要】
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通过原核表达方式纯化得到新冠病毒解旋酶(SARS-CoV-2-Nsp13),并利用荧光各向异性和凝胶阻滞试验探究了其体外结合DNA、RNA底物的亲和力及解旋双链DNA的最佳解旋条件.结果 表明,SARS-CoV-2-Nsp 13解旋酶具有结合单链DNA (ssDNA)、带有5\'尾链的双链DNA (5\'Oh-dsDNA)及RNA发卡结构(RNA-HP)的活力,亲和性依次为5\'Oh-dsDNA≈RNA-HP＞ssDNA,结合曲线呈S型.SARS-CoV-2-Nsp 13解旋酶与DNA、RNA
【机 构】
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西北农林科技大学生命科学学院生物化学与分子生物学教研室,陕西杨凌712100
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通过原核表达方式纯化得到新冠病毒解旋酶(SARS-CoV-2-Nsp13),并利用荧光各向异性和凝胶阻滞试验探究了其体外结合DNA、RNA底物的亲和力及解旋双链DNA的最佳解旋条件.结果 表明,SARS-CoV-2-Nsp 13解旋酶具有结合单链DNA (ssDNA)、带有5\'尾链的双链DNA (5\'Oh-dsDNA)及RNA发卡结构(RNA-HP)的活力,亲和性依次为5\'Oh-dsDNA≈RNA-HP＞ssDNA,结合曲线呈S型.SARS-CoV-2-Nsp 13解旋酶与DNA、RNA底物的结合具有协同性.SARS-CoV-2-Nsp13解旋酶可以解旋带有5\'尾链的双链DNA,解旋的方向为5\'-3\',发挥完全解旋活性的酶浓度为3 μmol/L;而该解旋酶解旋DNA双链的活性相对较弱,解旋活性在NaCl浓度达到80 mmol/L时受到明显的抑制.研究结论可为深入理解冠状病毒解旋酶的生化活性及工作机理提供参考和帮助.
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