【摘 要】
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目的 体外研究重组质粒pshRNA-DNMT3b对膀胱癌T24细胞中DNMT3bmRNA和蛋白的沉默效应以及细胞增殖抑制的影响,初步探讨DNMT3b在膀胱肿瘤发生过程中的作用.方法 实验分为空白对照组、HK组及pshRNA.DNMT3b组(24、48、72 h);常规培养T24细胞,用脂质体lipofectamine2000将重组质粒pshRNA-DNMT3b转染进入T24细胞,后进行RT-PCR
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属协和医院泌尿外科,湖北,武汉,430022,华中科技大学同济医学院附属协和医院泌尿外科,湖北,武汉,430022,华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室,湖北,武汉,4
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目的 体外研究重组质粒pshRNA-DNMT3b对膀胱癌T24细胞中DNMT3bmRNA和蛋白的沉默效应以及细胞增殖抑制的影响,初步探讨DNMT3b在膀胱肿瘤发生过程中的作用.方法 实验分为空白对照组、HK组及pshRNA.DNMT3b组(24、48、72 h);常规培养T24细胞,用脂质体lipofectamine2000将重组质粒pshRNA-DNMT3b转染进入T24细胞,后进行RT-PCR、Western Blot、MTT检测,观察pshRNA-DNMT3b对T24细胞中DNMT3bmRNA、蛋白质水平变化以及细胞增殖的影响.结果 重组质粒pshRNA-DNMT3b成功的转染进入T24细胞;RT-PCR电泳结果用Gel-pro analyzer图像分析系统进行灰度分析,空白对照组、HK组、pshRNA-DNMT3b组(24、48、72 h)条带的IOD相对比值(DNMT3/13.actin)分别是(99.56±1.24)%、(99.12±1.35)%、(75.77±1.42)%、(44.69±1.05)%和(20.52±0.89)%;Westem blot图像分析结果各组的相对比值分别是(99.43±1.28)%、(98.90±1.31)%、(67.83±1.02)%、(43.43±1.05)%和(21.92±0.89)%;在MTT检测中空白对照组和HK组之间差异无统计学意义(P＞0.05),pshRNA-DNMT3b组仅在72 h后和前2组之间差异有统计学意义(P＜0.01),但抑制率仅增加0.45%左右.结论 重组质粒pshRNA-DNMT3b能有效的降低膀胱癌T24细胞中基因DNMT3b mRNA的转录及蛋白的表达,但在抑制细胞增殖上作用甚微。
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