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摘 要：建立高效液相色谱法检测食品中甜蜜素的分析方法。利用甜蜜素在强酸环境下经过衍生、萃取等工艺处理，采用高效液相色谱分离。结果表明，在1.0～10.0 mg/L范围内，甜蜜素标准溶液线性回归方程y=3 896.1x+1 668.3，相关系数为0.999 3。样品添加回收率为84.3%～105.0%，测定结果的相对标准偏差（n=6）1.66%～1.81%，检出限为0.5 mg/kg。该方法快速、简便，在食品检验中具有实际应用价值。
关键词：甜蜜素;衍生;液相色谱
甜蜜素，化学名为环己基氨基磺酸钠，是一种应用广泛的食品添加剂[1]。我国国家标准《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》（GB 2760—2014）[2]中对甜蜜素的添加种类、添加量做了规定，但市场上超量、超范围使用甜蜜素的情况经常发生。目前《食品安全国家标准 食品中环己基氨基磺酸钠的测定》（GB 5009.97—2016）[3]的检测方法主要是液质串联质谱法、气相色谱法和液相色谱法。本文在酸性条件下对样品进行提取，利用次氯酸钠衍生将甜蜜素转化为N，N-二氯环己烷，以正庚烷萃取后用高效液相色谱法测定，减少了干扰，方法简单、快速、检出限低。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
仪器：岛津LC-20AT高效液相色谱仪配二极管阵列（PDA）检测器;分析天平;恒温水浴锅;离心机;0.22 μm针头微孔滤膜过滤器;超声波振荡器;艾杰尔ASB-C18色谱柱：250 mm×4.6 mm，5.0 μm。
试剂：甜蜜素标准品（10 mg/mL）;硫酸、次氯酸钠、盐酸、碳酸氢钠为分析纯试剂;乙腈、正庚烷、甲醇为色谱纯试剂;水为超纯水。
1.2 供試样品
面包，购自超市。
1.3 色谱条件
LC检测器为PDA;实验过程采用乙腈+水（70%+30%）以1.0 mL/min的流速洗脱;色谱柱为艾杰尔ASB-C18（250 mm×4.6 mm，5.0 μm）;在波长为314 nm、柱温为40 ℃的条件下进样;进样量为10 μL。
1.4 标准溶液的制备
准确移取浓度为10 mg/mL的标准物质溶液1.0 mL，用水定容至10 mL配制成甜蜜素标准储备液1 000 μg/mL。
甜蜜素标准曲线的制备，准确移取甜蜜素标准中间液0.10 mL、0.20 mL、0.50 mL、0.80 mL和1.0 mL于10 mL容量瓶中制成浓度为1.0 mg/L、2.0 mg/L、5.0 mg/L、8.0 mg/L和10 mg/L的标准使用溶液，用于衍生后，测定。
1.5 标准曲线工作液的衍生
将制备好的标准曲线工作液10 mL进行衍生。先加入5%次氯酸钠溶液2.0 mL后，再加入正庚烷6.0 mL，硫酸溶液
3.0 mL，涡旋混匀静止后待分层，除去水层，在正庚烷层加入5%碳酸氢钠溶液25 mL，涡旋混匀静止取上层经有机滤膜（0.22 μm）过滤，上机检测。
1.6 样品的提取
称取5 g样品（精确到0.01 g）于塑料离心管中，准确加入25mL 0.1 mol/L的HCL溶液，超声30 min后加入5 mL正己烷剧烈振荡用于除去样品中的油脂，5 000 r/min离心5 min，取出水层后备用。
1.7 样品的衍生
取样品10 mL，制备后按照标准曲线衍生方法进行同样操作。涡旋混匀静止取上层经有机滤膜（0.22 μm）过滤，上机检测。
2 结果与分析
2.1 提取溶液的选择
直接用水提取会提取和目标物相似的结构化合物，衍生后会出现杂乱峰影响判断。实验发现酸化水溶液和正己烷的混合溶液提取效果最好，部分样品内含有油脂，在提取样品的过程中会产生油脂包裹化合物的情况。以面包样品为基质添加水平为2.5 mg/kg的标准溶液进行实验，不同溶剂的回收率差异见表1。
2.2 色谱条件的选择
将甜蜜素的衍生物标准溶液在紫外分光光度计上200～350 nm的范围内进行扫描测定，综合考虑吸收峰值、干扰峰等因素，最终选取检测波长为314 nm。此峰值基线稳定、吸收值高且峰型满意。
流动相的选择，比较了不同比例的甲醇︰水（85%+15%，V︰V）、乙腈︰水（90%+10%，V︰V）、甲醇︰水（70%+30%，V︰V）、乙腈︰水（70%+30%，V︰V），发现乙腈︰水（70%+30%，V︰V）杂质干扰小，基线处于平稳的状态。经液相色谱分离后，甜蜜素的衍生物N，N-二氯环己胺能得到良好的分离，保留时间为6.895 min，峰形满意。如图1所示。
2.3 线性范围和检出限
对衍生后1.0 mg/L、2.0 mg/L、5.0 mg/L、8.0 mg/L和10 mg/L甜蜜素标准工作曲线进行测定，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。标准曲线如图2所示。从标准曲线上得出甜蜜素衍生物标准溶液的峰面积与浓度在1.0～10 mg/L范围内呈线性关系，其线性回归方程
y=3 896.1x+1 668.3，相关系数为0.9 993，外标法定量，方法的检出限为0.5 mg/kg。
2.4 样品测定
从图3可以看出，面包中不含有甜蜜素衍生物，在2.5～5.0 min有较强的溶剂峰，基线比较平稳，没有其他干扰。
2.5 方法准确度和精密度
称取已处理的样品5.0 g，添加100.0 mg/kg的甜蜜密标准中间溶液。平行测定6次，测定数据见表3，结果表明该面包样品加标回收率范围84.3%～105.0%，相对标准偏差（RSD）在1.66%～1.81%。
3 结论
本实验在酸性条件下对样品进行提取，利用次氯酸钠将食品中的甜蜜素转化为N，N-二氯环己胺，经正庚烷提取后用高效色谱法测定。此方法前处理操作简单，结果稳定且准确性高、重现性好，适用于食品中甜蜜素的检测。
参考文献
[1]邵铁峰，李雪珉，陈勤伟，等.高效液相色谱法测定酒中的甜蜜素[J].中国酿造.2004（12）：31-32.
[2]中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会.食品国家安全 食品添加剂使用标准：GB 2760—2014[S].北京：中国标准出版社，2014.
[3]中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会.食品安全国家标准 食品中环己基氨基磺酸钠的测定：GB 5009.97-2016[S].北京：中国标准出版社，2017.
关键词：甜蜜素;衍生;液相色谱
甜蜜素，化学名为环己基氨基磺酸钠，是一种应用广泛的食品添加剂[1]。我国国家标准《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》（GB 2760—2014）[2]中对甜蜜素的添加种类、添加量做了规定，但市场上超量、超范围使用甜蜜素的情况经常发生。目前《食品安全国家标准 食品中环己基氨基磺酸钠的测定》（GB 5009.97—2016）[3]的检测方法主要是液质串联质谱法、气相色谱法和液相色谱法。本文在酸性条件下对样品进行提取，利用次氯酸钠衍生将甜蜜素转化为N，N-二氯环己烷，以正庚烷萃取后用高效液相色谱法测定，减少了干扰，方法简单、快速、检出限低。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
仪器：岛津LC-20AT高效液相色谱仪配二极管阵列（PDA）检测器;分析天平;恒温水浴锅;离心机;0.22 μm针头微孔滤膜过滤器;超声波振荡器;艾杰尔ASB-C18色谱柱：250 mm×4.6 mm，5.0 μm。
试剂：甜蜜素标准品（10 mg/mL）;硫酸、次氯酸钠、盐酸、碳酸氢钠为分析纯试剂;乙腈、正庚烷、甲醇为色谱纯试剂;水为超纯水。
1.2 供試样品
面包，购自超市。
1.3 色谱条件
LC检测器为PDA;实验过程采用乙腈+水（70%+30%）以1.0 mL/min的流速洗脱;色谱柱为艾杰尔ASB-C18（250 mm×4.6 mm，5.0 μm）;在波长为314 nm、柱温为40 ℃的条件下进样;进样量为10 μL。
1.4 标准溶液的制备
准确移取浓度为10 mg/mL的标准物质溶液1.0 mL，用水定容至10 mL配制成甜蜜素标准储备液1 000 μg/mL。
甜蜜素标准曲线的制备，准确移取甜蜜素标准中间液0.10 mL、0.20 mL、0.50 mL、0.80 mL和1.0 mL于10 mL容量瓶中制成浓度为1.0 mg/L、2.0 mg/L、5.0 mg/L、8.0 mg/L和10 mg/L的标准使用溶液，用于衍生后，测定。
1.5 标准曲线工作液的衍生
将制备好的标准曲线工作液10 mL进行衍生。先加入5%次氯酸钠溶液2.0 mL后，再加入正庚烷6.0 mL，硫酸溶液
3.0 mL，涡旋混匀静止后待分层，除去水层，在正庚烷层加入5%碳酸氢钠溶液25 mL，涡旋混匀静止取上层经有机滤膜（0.22 μm）过滤，上机检测。
1.6 样品的提取
称取5 g样品（精确到0.01 g）于塑料离心管中，准确加入25mL 0.1 mol/L的HCL溶液，超声30 min后加入5 mL正己烷剧烈振荡用于除去样品中的油脂，5 000 r/min离心5 min，取出水层后备用。
1.7 样品的衍生
取样品10 mL，制备后按照标准曲线衍生方法进行同样操作。涡旋混匀静止取上层经有机滤膜（0.22 μm）过滤，上机检测。
2 结果与分析
2.1 提取溶液的选择
直接用水提取会提取和目标物相似的结构化合物，衍生后会出现杂乱峰影响判断。实验发现酸化水溶液和正己烷的混合溶液提取效果最好，部分样品内含有油脂，在提取样品的过程中会产生油脂包裹化合物的情况。以面包样品为基质添加水平为2.5 mg/kg的标准溶液进行实验，不同溶剂的回收率差异见表1。
2.2 色谱条件的选择
将甜蜜素的衍生物标准溶液在紫外分光光度计上200～350 nm的范围内进行扫描测定，综合考虑吸收峰值、干扰峰等因素，最终选取检测波长为314 nm。此峰值基线稳定、吸收值高且峰型满意。
流动相的选择，比较了不同比例的甲醇︰水（85%+15%，V︰V）、乙腈︰水（90%+10%，V︰V）、甲醇︰水（70%+30%，V︰V）、乙腈︰水（70%+30%，V︰V），发现乙腈︰水（70%+30%，V︰V）杂质干扰小，基线处于平稳的状态。经液相色谱分离后，甜蜜素的衍生物N，N-二氯环己胺能得到良好的分离，保留时间为6.895 min，峰形满意。如图1所示。
2.3 线性范围和检出限
对衍生后1.0 mg/L、2.0 mg/L、5.0 mg/L、8.0 mg/L和10 mg/L甜蜜素标准工作曲线进行测定，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。标准曲线如图2所示。从标准曲线上得出甜蜜素衍生物标准溶液的峰面积与浓度在1.0～10 mg/L范围内呈线性关系，其线性回归方程
y=3 896.1x+1 668.3，相关系数为0.9 993，外标法定量，方法的检出限为0.5 mg/kg。
2.4 样品测定
从图3可以看出，面包中不含有甜蜜素衍生物，在2.5～5.0 min有较强的溶剂峰，基线比较平稳，没有其他干扰。
2.5 方法准确度和精密度
称取已处理的样品5.0 g，添加100.0 mg/kg的甜蜜密标准中间溶液。平行测定6次，测定数据见表3，结果表明该面包样品加标回收率范围84.3%～105.0%，相对标准偏差（RSD）在1.66%～1.81%。
3 结论
本实验在酸性条件下对样品进行提取，利用次氯酸钠将食品中的甜蜜素转化为N，N-二氯环己胺，经正庚烷提取后用高效色谱法测定。此方法前处理操作简单，结果稳定且准确性高、重现性好，适用于食品中甜蜜素的检测。
参考文献
[1]邵铁峰，李雪珉，陈勤伟，等.高效液相色谱法测定酒中的甜蜜素[J].中国酿造.2004（12）：31-32.
[2]中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会.食品国家安全 食品添加剂使用标准：GB 2760—2014[S].北京：中国标准出版社，2014.
[3]中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会.食品安全国家标准 食品中环己基氨基磺酸钠的测定：GB 5009.97-2016[S].北京：中国标准出版社，2017.