【摘 要】
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对硅胶干燥保存制备新疆野扁桃DNA样品和SSR反应体系优化进行了研究。结果表明:在室温下贮存3个月、6个月、9个月、1年和2年的硅胶干燥的同一野扁桃叶片材料中采用改进的CTAB
【机 构】
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新疆农业大学林学园艺学院,新疆农业大学农学院,华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室
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对硅胶干燥保存制备新疆野扁桃DNA样品和SSR反应体系优化进行了研究。结果表明:在室温下贮存3个月、6个月、9个月、1年和2年的硅胶干燥的同一野扁桃叶片材料中采用改进的CTAB法提取了高质量的基因组总DNA,较好的克服了野扁桃叶片中含有较高的多糖、多酚、色素以及单宁等次生物质的影响。通过A260/A280、琼脂糖凝胶电泳和PCR-SSR扩增结果分析对提取的基因组DNA进行了鉴定,2年内不同保存时期的同一材料对于DNA提取没有明显差异,提取的DNA用于SSR扩增所得的扩增产物也均无明显差异;确立野扁桃最佳的PCR-SSR反应体系是30~50 ng DNA模板,0.5 U TaqDNA聚合酶,2.0 mmol.L-1MgCl2,0.2 mmol.L-1dNTPs,0.2 mmol.L-1的引物,10×Taq酶配套缓冲液(pH8.0),反应终体积20μL,引物最佳退火温度为54~57℃。利用40个野扁桃随机叶样验证此反应体系,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测结果显示,扩增产物在200~600 bp,多态性高,且反应体系的稳定性和可重复性好。
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