【摘 要】
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目的:通过基因工程手段在大肠杆菌中表达HSP65-MUC1 VNTR2融合蛋白、鉴定和纯化,并研究其在动物体内的肿瘤生长抑制活性.方法:通过PCR获得结核分支杆菌HSP65基因,以重叠PCR获
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目的:通过基因工程手段在大肠杆菌中表达HSP65-MUC1 VNTR2融合蛋白、鉴定和纯化,并研究其在动物体内的肿瘤生长抑制活性.方法:通过PCR获得结核分支杆菌HSP65基因,以重叠PCR获得人MUC1基因VNTR的2个重复序列,构建原核重组表达载体HSP65-MUC1 VNTR2-pET28a(+),在大肠杆菌BL21(DE3)中利用IPTG诱导表达;利用单克隆抗体(mAb)进行Western blot鉴定,以Q柱和凝胶过滤纯化获得纯化蛋白.通过建立转染人MUC1基因的B16黑色素瘤小鼠肿瘤模型,在C57BL/6小鼠体内研究HSP65-MUC1 VNTR2融合蛋白的肿瘤生长抑制活性.结果:获得的结核分支杆菌HSP65基因和人MUC1基因VNTR区的2个重复片段,经测序证明分别与GenBank中结核杆菌HSP65基因和人MUC1基因的VNTR完全相符;构建的原核表达载体HSP65-MUC1 VNTR2-pET28a(+)可稳定的可溶性表达HSP65-MUC1VNTR2蛋白;经Q柱和凝胶过滤纯化,纯化的目的蛋白纯度达95%以上;利用鼠抗人MUC1 mAb对表达蛋白进行验证,结果阳性;小鼠肿瘤预防免疫实验表明,实验组小鼠抑瘤率大于对照组,且具有明显性差异.结论:成功地利用原核表达系统实现了对HSP65-MUC1 VNTR2蛋白的可溶性表达,并对其体内预防实验进行了初步研究,证明该融合蛋白能明显抑制表达MUC1的肿瘤生长.为进一步评价其作为肿瘤疫苗可能性的研究打下了基础.
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