【摘 要】
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为深入研究山羊AP1M1(adaptor related protein complex 1 subunit mu 1)在机体生长和繁殖中的作用,采用RT-PCR方法克隆了山羊AP1M1基因,并对其序列和编码蛋白进行分析;构建
【机 构】
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西南大学动物科技学院; 重庆市三峡中心医院中心实验室; 重庆医科大学基础医学院; 西北农林科技大学动物科技学院;
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(31772564);中央高校基本业务费专项资金资助项目(XDJK2017A003);重庆市社会民生科技创新专项资助项目(cstc2016shmszx80064,cstc2017shms-zdyfX0045);重庆市基础与前沿研究计划资助项目(cstc-2017jcyjAX0079);国家重点研发计划资助项目(2018YFD0502003);重庆高校创新团队建设计划资助
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为深入研究山羊AP1M1(adaptor related protein complex 1 subunit mu 1)在机体生长和繁殖中的作用,采用RT-PCR方法克隆了山羊AP1M1基因,并对其序列和编码蛋白进行分析;构建了pET-30α-AP1M1原核表达载体,免疫实验兔,制备AP1M1基因多克隆抗体;采用qPCR和Western blot检测比较AP1M1在山羊不同组织及睾丸不同发育时期的表达特征。结果显示,山羊AP1M1基因CDS为1 272 bp,编码423个氨基酸,具有1个Clat-adaptor结构域、1个Adap-comp结构域和5个蛋白质-蛋白质结合位点,在哺乳动物中极为保守。间接ELISA和Western blot结果表明,制备的兔抗pET-30α-AP1M1多克隆抗体效价为1∶128 000,可以与重组蛋白特异性结合。表达模式检测结果显示,AP1M1在成年山羊各组织中均有不同程度的表达,其中在肾脏的表达量最高,其次是睾丸,均极显著高于其他组织(P<0.01);此外,AP1M1在山羊不同发育时期睾丸组织中均有表达,但在性成熟时显著增加(P<0.01),体成熟时达到最高。本试验为进一步探索该基因在山羊睾丸中的功能奠定基础。
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