【摘 要】
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目的研究DNA依赖的蛋白激酶催化亚基(DNA－PKcs)的表达对胶质瘤细胞生长、侵袭、以及化疗敏感性等生物学行为的影响，并探讨其潜在机制。方法选取人胶质瘤细胞系H4、U87细胞，分别转染阴性对照(空白对照组)和DNA－PKcs小干扰RNA(siRNA，实验组)，利用实时定量PCR(qPCR)与蛋白质免疫印迹技术检测敲降效率；随后，分别采用MTS法检测细胞生长、Transwell小室模型检测细胞侵袭
【机 构】
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100093 北京，首都医科大学三博脑科医院神经外科；中国医学科学院肿瘤医院分子肿瘤学国家重点实验室,中国医学科学院肿瘤医院分子肿瘤学国家重点实验室,中国医学科学院肿瘤医院分子肿瘤学国家重点实验室,中
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目的研究DNA依赖的蛋白激酶催化亚基(DNA－PKcs)的表达对胶质瘤细胞生长、侵袭、以及化疗敏感性等生物学行为的影响，并探讨其潜在机制。
方法选取人胶质瘤细胞系H4、U87细胞，分别转染阴性对照(空白对照组)和DNA－PKcs小干扰RNA(siRNA，实验组)，利用实时定量PCR(qPCR)与蛋白质免疫印迹技术检测敲降效率；随后，分别采用MTS法检测细胞生长、Transwell小室模型检测细胞侵袭能力，以及利用MTS法检测替莫唑胺半数致死剂量(IC50)，探究低表达DNA－PKcs对胶质瘤细胞系上述生物学行为的影响。
结果与空白对照组相比，DNA－PKcs特异性siRNA能显著降低靶基因mRNA与蛋白的表达水平；MTS检测发现，实验组细胞72 h生长能力仅为对照组的52.48%、54.70%(H4细胞)以及52.98%、50.45%(U87细胞)；Transwell小室模型检测显示，空白对照组与实验组细胞侵袭能力分别为1.00±0.03、0.41±0.05、0.39±0.04(H4细胞)以及1.00±0.02、0.28±0.04、0.27±0.04(U87细胞)；同时，低表达DNA－PKcs还能显著降低替莫唑胺(TMZ)的IC50值(H4细胞：249±27，97±39，88±35；U87细胞：485±41，86±49，73±38)；利用免疫印迹技术深入探究降低DNA－PKcs对上述表型影响的潜在机制，结果发现AKT信号通路活性随DNA－PKcs表达水平的降低而下调；相较于空白对照组，实验组中AKT下游效应蛋白，例如c－Myc、MMP9及Survivin表达水平也存在不同程度的下调。
结论降低DNA－PKcs表达水平能显著抑制胶质瘤细胞生长、侵袭能力，增强替莫唑胺的治疗敏感性，其机制主要与抑制AKT信号通路以及下游效应分子表达水平有关。
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