斑马鱼(Danio rerio)长非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)基因Nondret002679与人(Homo sapiens)肿瘤相关基因间长非编码RNA682基因LNC-PHOX2B-2具有同源序列。本研究以斑马鱼为模型,利用成簇规律间隔短回文重复序列/成簇规律间隔短回文重复序列关联蛋白9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9,CRISPR/Cas9)系统,敲除预测的Nondret002679基因启动子区以沉默Nondret002679基因的表达,研究lnc RNA基因Nondret002679在斑马鱼中的调控功能。首先利用启动子区上下游序列设计靶向不同位点的向导RNA(guide RNA)g R1、g R2、g R3、g R4、g R5和g R6。人工合成g RNA转录模板,体外转录为g RNA,与Cas9 m RNA一起显微注射到斑马鱼卵中。PCR鉴定28尾2月龄斑马鱼发现,11尾发生敲除,敲除率为39%。繁殖启动子区敲除的杂合鱼,获得33尾F1代,经鉴定有6尾F1斑马鱼启动子区缺失,其中3尾缺失是在两条同源染色体上。该初步研究表明,CRISPR/Cas9系统可高效敲除lnc RNA基因的启动子区,并且这种敲除可以遗传至下一代,为研究lnc RNA功能提供了一个有效的基因编辑工具。