【摘 要】
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目的 分离并鉴定巨噬细胞来源的外泌体,为当前外泌体的提取研究提供一定参考,并为后续开展外泌体与牙周组织再生的相关研究奠定基础.方法 体外培养巨噬细胞RAW264.7,使用超速离心和超滤结合法提取其外泌体,通过BCA试剂盒测定外泌体的蛋白总量,透射电镜下观察其形态特征,粒径分析仪测定其粒径大小及浓度,免疫印迹法检测外泌体阳性标志蛋白CD9、CD81、TSG101、Calnexin的表达.结果 325 mL巨噬细胞培养上清液中提取出446μg外泌体,其呈现为内部含有不均匀的低电子密度物质的囊泡状结构,平均粒径
【机 构】
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南京大学医学院附属口腔医院南京市口腔医院副院长办公室,江苏 南京 210008
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目的 分离并鉴定巨噬细胞来源的外泌体,为当前外泌体的提取研究提供一定参考,并为后续开展外泌体与牙周组织再生的相关研究奠定基础.方法 体外培养巨噬细胞RAW264.7,使用超速离心和超滤结合法提取其外泌体,通过BCA试剂盒测定外泌体的蛋白总量,透射电镜下观察其形态特征,粒径分析仪测定其粒径大小及浓度,免疫印迹法检测外泌体阳性标志蛋白CD9、CD81、TSG101、Calnexin的表达.结果 325 mL巨噬细胞培养上清液中提取出446μg外泌体,其呈现为内部含有不均匀的低电子密度物质的囊泡状结构,平均粒径约81.20 nm,浓度为(2.90E+10)Particles/mL.阳性标志蛋白CD9、TSG101在外泌体中表达,阴性标志蛋白Calnexin无表达.结论 成功分离了巨噬细胞RAW264.7来源的外泌体,具有外泌体的一般特性,提取含量及纯度较高.
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