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目的:建立牡丹皮药材的高效液相色谱（HPLC）指纹图谱,并进行聚类分析。方法:采用HPLC法,色谱柱为Ecosil C18,流动相为0.2%甲酸溶液-乙腈（梯度洗脱）,流速为1.0 m L/min,柱温为25℃,进样量为10μL。以丹皮酚为参照,绘制69批（S1～S69）药材样品的HPLC图谱,采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004 A）》进行相似度评价,确定共有峰。采用HPLC-质谱（MS）法鉴定共有峰对应成分[HPLC条件同上;MS条件为电喷雾离子源,正、负离子模式检测,扫描范围为m/z 100～1 200,干燥气为N2（纯度:99.999 9%）,干燥气流速为15 L/min,干燥气温度为350℃,碰撞低能量为4 V,碰撞高能量为10～40 V]。采用SPSS20.0软件对69批药材样品进行聚类分析。结果:69批药材样品的HPLC图谱有29个共有峰,除6批药材样品外其余样品相似度均大于0.900。采用HPLC-MS法鉴定出29个共有峰的对应成分。69批药材样品可聚为5类,其中,S19、S22、S26、S29、S30、S33、S34、S38、S43、S46、S49～S51、S53、S56、S57、S64、S65聚为Ⅰ类,S4～S6、S41聚为Ⅱ类,S1～S3、S7～S10、S12、S24、S25、S54、S59聚为Ⅲ类,S15、S23、S35～S37、S39、S40、S47、S48、S52、S58、S66、S67、S69聚为Ⅳ类,S11、S13、S14、S16～S18、S20、S21、S27、S28、S31、S32、S42、S44、S45、S55、S60～S63、S68聚为Ⅴ类。结论:所建HPLC指纹图谱、成分鉴定和聚类分析结果可为牡丹皮药材的真伪鉴别和质量评价提供依据。