【摘 要】
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目的 探讨体外高效地诱导人羊水来源干细胞向平滑肌样细胞的分化,评估细胞与聚羟基乙酸(PGA)支架复合物的生物相容性,由此探讨该复合物用于组织工程膀胱平滑肌重建的可行性.
【机 构】
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上海交通大学附属儿童医院小儿泌尿外科
【基金项目】
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上海市教育委员会科研创新项目;上海市科学技术委员会基金
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目的 探讨体外高效地诱导人羊水来源干细胞向平滑肌样细胞的分化,评估细胞与聚羟基乙酸(PGA)支架复合物的生物相容性,由此探讨该复合物用于组织工程膀胱平滑肌重建的可行性.方法 孕中期B超引导下穿刺抽取羊水,体外分离挑选原代人羊水来源的干细胞(hAFCESs),取第三代细胞用肌源性生长因子(PDGF-BB)和转化生长因子β1(TGF-β1)和左旋维生素C(L-AA)在体外分别诱导分化3周、4周和5周,然后光镜下观察诱导后细胞生长的形态变化,免疫荧光细胞染色和RT-PCR检测平滑肌细胞的标志物.取第四代人羊水来源干细胞种植到非编织PGA材料上,体外诱导培养4周后移植到裸鼠背部皮下,4周后取材进行体内外种植效果的评价.结果 hAVESCs体外增殖能力强,RT-PCR、免疫荧光细胞染色显示经诱导的hAFCSCs表达平滑肌细胞的标志物平滑肌肌动蛋白(α-SMA),肌钙蛋白(CALP),平滑肌22α(SM22α)和肌球蛋白重链(MHC).PGA支架上的hAFCSCs在种植4 h后开始正常贴附、生长和增殖,细胞形态良好.扫描电镜显示hAFCSCs紧密贴附到PGA支架材料上并分泌细胞外基质.冰冻切片免疫荧光染色显示组织块中表达平滑肌细胞的标志物.结论 hAFCSCs能在肌源性生长因子(PDGF-BB和TGF-β1)和左旋维生素C(LAA)的诱导作用下高效地分化为平滑肌样细胞.复合hAFCSCs的PGA支架体外具有良好的生物相容性及体内较好的组织相容性,表明以hAFCSCs为种子细胞、PGA为支架构建组织工程膀胱平滑肌具有可行性.
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