橙皮素对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖及胶原蛋白合成的抑制作用

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目的:探讨橙皮素对血管紧张素Ⅱ( AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞增殖及胶原蛋白沉积的影响。方法实验分为空白对照组、AngⅡ组、AngⅡ+橙皮素组、AngⅡ+N-乙酰半胱氨酸( NAC)组,不同因素干预成纤维细胞24 h后,采用锥虫蓝染色法检测各组成纤维细胞生存活性的影响;酶标仪检测法检测各组成纤维细胞产生的活性氧( ROS);实时( Real-Time) PCR检测各组成纤维细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及基质金属蛋白酶-1(MMP-1)基因的表达;活细胞计数试剂盒(CCK-8)检测各组成纤维细胞增殖情况。结果橙皮素(25、50、100μmol/L)及AngⅡ(1μmol/L)+橙皮素对成纤维细胞生存活性均无影响(均P>0.05);与空白对照组比,AngⅡ可显著提高成纤维细胞中ROS的表达(1.70±0.12比1,P<0.01),Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白基因的表达均上调(1.31±0.08、1.40±0.09比1,均P<0.01),MMP-1基因表达下调(0.68±0.03比1,P<0.01),AngⅡ也可诱导成纤维细胞增殖(1.91±0.18比1,P<0.01)。橙皮素或NAC与AngⅡ同时作用则可逆转这种现象,与AngⅡ组相比,橙皮素(25、50、100μmol/L)及NAC(1 mmol/L)均可抑制 ROS 的表达(1.37±0.05、1.16±0.08、1.07±0.07及1.12±0.07比1.70±0.12,均P<0.01),Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白基因的表达均下调(1.22±0.08、1.14±0.07、1.02±0.06及1.08±0.07比1.31±0.08;1.27±0.07、1.00±0.06、0.99±0.05及1.09±0.06比1.40±0.09,均P<0.01),MMP-1基因的表达均上调(0.76±0.05、0.88±0.07、1.01±0.08及0.96±0.07比0.68±0.03,均P<0.01),细胞的增殖能力也有下降(1.42±0.07、1.38±0.03、1.07±0.15及1.16±0.11比1.91±0.18,均P<0.01)。结论橙皮素可抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞中ROS的产生,从而抑制胶原蛋白的合成,橙皮素也可通过抑制ROS抑制Ang Ⅱ诱导的成纤维细胞增殖。
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