【摘 要】
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背景:骨髓间质干细胞作为种子细胞具有巨大的分化潜力和优势,但对于再牛障碍性贫血或骨髓源性肿瘤等疾病的应用受限.现已发现肌源性干细胞具备与其相似的优越性,已引起相关领
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背景:骨髓间质干细胞作为种子细胞具有巨大的分化潜力和优势,但对于再牛障碍性贫血或骨髓源性肿瘤等疾病的应用受限.现已发现肌源性干细胞具备与其相似的优越性,已引起相关领域研究者的注意.目的:观察兔肌源性干细胞的生物学特性,并对其进行表犁分析.设计、时间和地点:细胞体外观察,于2005-08/2006-03在中山大学附属第二医院医研中心完成.材料:清洁级1.5月龄新西兰大向兔1只,增殖培养基为DMEM-LG+体积分数0.1胎牛血清+100 g/L马血清,融合培养基为DMEM-LG+2%胎牛血清.方法:兔麻醉后取大腿肌肉,采用差速贴壁Preplate技术分离培养肌源性干细胞,以Ⅺ胶原酶、disperse蛋白酶及胰蛋白酶分步消化,沉淀用增殖培养基重悬,接种在胶原包被的培养瓶中,该培养瓶为PP1.PP1于37℃、含体积分数为0.05的CO2培养箱中静置过夜,随后将悬液转移到另一个胶原包被的培养瓶,此为PP2.随后同法建立PP3,PP4,PP5,PP6.将PP6接种到6孔板进行融合实验,分为两组:一组使用增殖培养基培养,在汇合度超过50%后继续培养,不传代:另一组使用融合培养基进行培养,汇合度达30%时传代培养.主要观察指标:收集PP1-PP6,采用流式细胞仪、免疫细胞化学及Western Blot法鉴定细胞表型.通过不同汇合度及不同浓度血清培养,检测PP6融合情况.结果:PP6细胞＞80%为desmin+,＞70%为Bcl-2+,＞95%为CD45,提示为高浓度肌源性干细胞,随着纯化步骤的进行,α-SMA表达逐渐减弱,至高度纯化的PP6时已无α-SMA表达.PP6在高汇合度(＞50%)或低血清(仅含2%血清)培养时,极易融合成肌管或肌细胞链,骨骼肌肌球蛋白呈阳性表达.结论:肌源性干细胞具有高水平表达desmin,Bcl-2,极低水平表达CD45,不表达α-SMA的生物学特性,在高汇合度或低血清培养条件下能够多向分化.
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